經(jīng)血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子刺激的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療急性放射性腸損傷的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本文主要從以下幾個(gè)部分展開(kāi)論述：
　　第一部分 SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)、純化及其生物學(xué)特性鑒定
　　目的：SD大鼠BMSCs的體外分離、培養(yǎng)和純化，以及生物學(xué)特性鑒定，為整個(gè)課題打下基礎(chǔ)。
　　方法：聯(lián)合采用密度梯度離心法和全骨髓貼壁培養(yǎng)法，分離培養(yǎng)和純化BMSCs，同時(shí)顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)狀況。流式細(xì)胞儀鑒定細(xì)胞表面標(biāo)記物，鑒定其向成骨、成脂分化潛能。
　　結(jié)果：分離培養(yǎng)的BMSCs呈梭形、大小均

2、一，類似成纖維細(xì)胞樣。流式結(jié)果顯示BMSCs表面CD44、CD90陽(yáng)性表達(dá)，而CD45陰性表達(dá)。P3代BMSCs可向成骨、成脂誘導(dǎo)分化。
　　結(jié)論：本部分實(shí)驗(yàn)成功分離培養(yǎng)了BMSCs，純度高、形態(tài)均一，可用于之后的相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究。
　　第二部分 VEGF刺激骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞后CXCR4表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究
　　目的：探討B(tài)MSCs經(jīng)VEGF刺激后對(duì)其歸巢的影響
　　方法：將第一部分分離培養(yǎng)的BMSCs隨機(jī)分成3組，A組：

3、空白對(duì)照組，完全培養(yǎng)基培養(yǎng)；B組：在BMSCs的完全培養(yǎng)液中加入VEGF，使最終VEGF濃度為10ng/ml。C組：在BMCs的完全培養(yǎng)液中加入VEGF，使最終VEGF濃度為50ng/ml。流式細(xì)胞分別測(cè)量刺激48h后各組胞膜和胞膜內(nèi)CXCR4的表達(dá)。
　　結(jié)果：各組BMSCs胞膜和胞膜內(nèi)均有CXCR4表達(dá)，且胞膜內(nèi)高于胞膜的表達(dá)，其中C組表達(dá)均最高，P<0.05
　　結(jié)論：1、BMSCs和經(jīng)VEGF刺激的BMSCs胞膜和胞

4、膜內(nèi)均有CXCR4表達(dá)；2、VEGF刺激BMSCs后，胞膜和胞膜內(nèi)CXCR4表達(dá)增高；且50ng/ml濃度下表達(dá)最高；
　　第三部分 SDF-1在放射性損傷的腸組織中的表達(dá)
　　目的：1、建立急性放射性腸損傷的模型；
　　2、進(jìn)一步探討VEGF對(duì)BMSCs的歸巢影響。
　　方法：90只雌性的SD大鼠隨機(jī)分成3組（每組30只），即對(duì)照組（A組）、BMSCs治療組（B組）和經(jīng)VEGF刺激的BMSCs的治療組（C組）。

5、B組和C組在照射后4小時(shí)內(nèi)通過(guò)尾靜脈注射1×106/ml的雄性大鼠BMSCs懸液1ml及經(jīng)50ng/ml的VEGF刺激48小時(shí)后的BMSCs懸液1ml；A組于照射后4小時(shí)內(nèi)尾靜脈輸注生理鹽水1ml。造模后第1、3、7、14、21天每組隨機(jī)處死6只大鼠，留取全血與兩份末端回腸標(biāo)本。顯微鏡下觀察腸道組織結(jié)構(gòu)，測(cè)量絨毛高度及隱窩深度；ELISA法測(cè)量血清中瓜氨酸和VEGF的濃度。免疫組化SP法檢測(cè)造模后3天腸組織SDF-1的表達(dá)。
　　

6、結(jié)果：1、成功建立了放射性腸損傷模型；造模后第3、7、14天，C組大鼠精神狀態(tài)，運(yùn)動(dòng)量，飲食量，排泄?fàn)顩r均優(yōu)于A組、B組，而造模后第1、21天三組大鼠之間無(wú)明顯差異。HE染色結(jié)果顯示，造模后第3、7、14天，C組腸道結(jié)構(gòu)較A、B組完整，腸粘膜上皮細(xì)胞壞死少，伴有的炎性細(xì)胞較少，而腺體結(jié)構(gòu)卻較豐富。通過(guò)測(cè)量腸道絨毛高度和隱窩深度評(píng)估腸道功能，造模后第3、7、14天，同一時(shí)期絨毛高度和隱窩深度，C>B>A，P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。造模后第

7、1、21天，同一時(shí)期絨毛高度和隱窩深度，各組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，P>0.05.
　　2、免疫組化SP法測(cè)量各組受損腸組織SDF-1的表達(dá)量，發(fā)現(xiàn)C組SDF-1的表達(dá)量明顯高于A、B組，且B組表達(dá)量高于A組。
　　結(jié)論：1、直線加速器建立放射性腸損傷模型的劑量為12Gy；
　　2、放射性腸損傷可以自我修復(fù)，周期在2～3周左右；
　　3、經(jīng)VEGF刺激的BMSCs能夠促進(jìn)急性放射性腸損傷的修復(fù)，能提高其修復(fù)的效率，但從遠(yuǎn)期