抗菌肽Thanatin基因載體構(gòu)建和表達(dá)及提高植物對菌核病抗性的研究.pdf

1、抗菌肽是生物體防御系統(tǒng)產(chǎn)生的一類對外源病菌具有高效殺滅活性的小分子多肽，在植物抗病基因工程中具有重要的應(yīng)用價值。Thanatin是刺肩蝽(PodisusmacuLiventris)成蟲經(jīng)誘導(dǎo)產(chǎn)生的一種抗菌肽，由21個氨基酸殘基組成，該抗菌肽對細(xì)菌以及真菌都有很強的抗菌活性，本研究通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)將其轉(zhuǎn)入模式植物擬南芥和油菜，以提高植物的抗病性尤其是對菌核病的抗性。 1 Thanatin 的融合植物表達(dá)載體的構(gòu)建根據(jù)GenBank登

2、錄的Thanatin序列設(shè)計引物，分別合成前端含信號肽和連接肽的基因片段，即SP-Thanatin和LP-Thanatin，分別克隆到pMD18-T載體上。通過SP-Thanatin3’端設(shè)計了BglⅡ切點，LP-Tqaanatin 5’設(shè)計了Barn HI切點，利用Bgl Ⅱ和Bam HI為同尾酶的特點，LP-Thanatin BglⅡ/BamHI雙酶切片斷可多輪次替換SP-Thanatin上的終止密碼子(TAG)構(gòu)建成可剪切多拷貝抗

3、菌肽融合植物表達(dá)載體。結(jié)果鑒定1-5拷貝的Thanatin融合植物表達(dá)載體構(gòu)建成功。 2 轉(zhuǎn)基因油菜和擬南芥的獲得通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)和In planta技術(shù)將1-5拷貝的Thanatin融合植物表達(dá)載體分別轉(zhuǎn)化油菜和擬南芥，由于轉(zhuǎn)油菜的周期長和效率低，目前我們只獲得5拷貝的T<,0>代轉(zhuǎn)基因油菜，而獲得了1-5拷貝的全部轉(zhuǎn)基因T<,0>代擬南芥，對轉(zhuǎn)基因油菜和擬南芥進(jìn)行菌核病抗性鑒定，結(jié)果顯示轉(zhuǎn)基因植株中并無預(yù)期中的高抗菌核病類型。