冷誘導(dǎo)抗凍肽植物表達(dá)載體的構(gòu)建和轉(zhuǎn)基因煙草的檢測.pdf

1、該文就該室謝秀杰、朱曄榮構(gòu)建的誘導(dǎo)型表達(dá)抗凍肽八聯(lián)體基因及組成型表達(dá)抗凍肽四聯(lián)體基因用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)基因煙草,并對篩選到的卡那霉素抗性植株分別進(jìn)行不同的檢測.對前者,因?yàn)橹x秀杰構(gòu)建的誘導(dǎo)型表達(dá)的抗凍肽八聯(lián)體基因是與GUS報(bào)告基因融合表達(dá)的,所以作者主要是對GUS報(bào)告基因進(jìn)行了活性檢測.通過熒光光度分析法檢測,得到轉(zhuǎn)基因植株的GUS表達(dá)活性明顯高于對照植株;通過組織化學(xué)法檢測,觀察到GUS融合基因在轉(zhuǎn)基因植株莖橫切面維管束附近細(xì)胞間隙分泌

2、表達(dá),在葉片的徒手切片細(xì)胞組織中也有表達(dá),出現(xiàn)許多藍(lán)色斑點(diǎn).所以可以認(rèn)為與GUS基因融合表達(dá)的抗凍肽基因同樣在轉(zhuǎn)基因植株中表達(dá),而且是組織特異性分泌表達(dá).對后者,轉(zhuǎn)組成型表達(dá)抗凍肽四聯(lián)體基因的煙草植株,作者進(jìn)行了Southern blot分析,基本上檢測到外源基因已整合到煙草基因組DNA中,還可以對轉(zhuǎn)基因植株做進(jìn)一步的檢測.根據(jù)近幾年冷誘導(dǎo)基因及其表達(dá)調(diào)控元件的研究成果,該文設(shè)計(jì)合成了冷誘導(dǎo)基因表達(dá)調(diào)控元件C-repeat/DRE及其轉(zhuǎn)