真核細胞翻譯起始因子4E在慢性粒細胞白血病中的作用研究.pdf

1、第一部分EIF4E在白血病和淋巴瘤細胞系中的表達 目的:探討真核細胞翻譯起始因子4E(EIF4E)在人白血病和淋巴瘤細胞系中的表達。 方法:采用RT-PCR和western-blot方法研究了6株人白血病、淋巴瘤細胞系(人急性單核細胞白血病細胞系U937，人急性早幼粒細胞白血病系HL60，人慢性粒細胞白血病細胞系K562，人急性淋巴細胞白血病細胞系Molt-4，人Burkit淋巴瘤細胞系Raji和Daudi)和正常人外周

2、血單個核細胞EIF4E的表達。 結(jié)論:EIF4E可能在白血病和淋巴瘤的發(fā)生發(fā)展中起一定作用。 第二部分正、反義EIF4E真核表達載體的構(gòu)建及鑒定 目的:構(gòu)建正、反義人全長EIF4E基因真核表達質(zhì)粒，為研究EIF4E基因功能提供工具。 方法:根據(jù)EIF4E基因cDNA序列中編碼序列，設(shè)計PCR引物，在上下游引物5'端分別添加ApaⅠ和KpnⅠ酶切位點，RT-PCR從K562細胞中獲得760bp的DNA片斷，

3、然后將該片斷正、反向插入真核表達載體pEGFP-C1的多克隆位點，構(gòu)建正、反義EIF4E基因片斷真核表達質(zhì)粒，并用PCR、酶切法和DNA測序鑒定。 結(jié)論:通過基因克隆技術(shù)，成功構(gòu)建了正、反義EIF4E基因真核表達質(zhì)粒，為進一步研究EIF4E基因功能提供了實驗工具。 第三部分EIF4E對慢性粒細胞白血病細胞增殖的影響 目的:翻譯控制在腫瘤細胞早期發(fā)展、分化和細胞周期過程中起著重要的作用。翻譯起始因子是真核細胞翻譯過

4、程的限速因子，在CML患者白血病細胞和CML細胞系K562中高表達。本文旨在研究EIF4E對CML細胞增殖的影響。 方法:正、反義重組EIF4E質(zhì)粒電轉(zhuǎn)染至K562細胞中，采用G418穩(wěn)定篩選轉(zhuǎn)染正義EIF4E質(zhì)粒(pEIF4E)的穩(wěn)定細胞系，流式細胞儀分選瞬時轉(zhuǎn)染反義EIF4E質(zhì)粒(pEIF4Eas)的細胞。通過流式細胞術(shù)和熒光顯微鏡觀察確定細胞轉(zhuǎn)染效率，RT-PCR，western-blot和免疫細胞化學(xué)檢測EIF4E蛋白和

5、mRNA水平的改變。體外觀察EIF4E表達改變對K562細胞周期、增殖和cyclinD1表達的影響。 結(jié)論:EIF4E基因在慢性粒細胞白血病細胞系K562的細胞增殖中起重要作用，其表達增高促進K562細胞的增殖。 第四部分EIF4E對慢性粒細胞白血病細胞分化的影響 目的:研究表明，EIF4E不僅和腫瘤細胞的惡性增殖密切有關(guān)，還與某些腫瘤細胞的分化密切相關(guān)，多數(shù)情況下，EIF4E表達上調(diào)可阻滯腫瘤細胞的誘導(dǎo)分化。失

6、分化和惡性增殖是白血病細胞的特征，為此，我們研究了EIF4E在誘導(dǎo)慢性粒細胞白血病細胞分化中的作用。 方法:以pEIF4E/K562、pEGFP-C1/K562和K562細胞為研究對象，分別以Hu、TPA和HMBA為誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)向紅細胞系、巨核細胞系及單核巨噬系分化。采用瑞氏－姬姆薩染色觀察細胞誘導(dǎo)前后形態(tài)改變，并采用聯(lián)苯胺染色、CD41和CD14的表達率分別檢測誘導(dǎo)后紅系祖細胞、巨核細胞和單核細胞的表達率。 結(jié)論:EIF