UC惡性轉(zhuǎn)化中MDSC的誘導(dǎo)作用機(jī)制研究.pdf

1、目的:以潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis，UC)惡性轉(zhuǎn)化模型為基礎(chǔ)，尋找誘導(dǎo)髓系來源抑制性細(xì)胞(Myeloid-derived suppressor cells，MDSC)產(chǎn)生的因素，探究MDSC與UC惡性轉(zhuǎn)化的聯(lián)系和分子機(jī)制，期望為臨床上控制腫瘤發(fā)生和發(fā)展提供新思路。
　　方法:建立小鼠UC相關(guān)結(jié)直腸癌(colitis-associated colorectalcancer，CAC)模型并合理分期。用流式細(xì)胞術(shù)

2、和實時定量PCR技術(shù)分別檢測結(jié)腸固有層細(xì)胞中MDSC的比例和該群細(xì)胞精氨酸酶1（arginase-1，Arg-1）和一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase，iNOS)的mRNA的表達(dá)，同時用高效液相色譜法檢測結(jié)腸組織培養(yǎng)上清和血清中的精氨酸的含量，ELISA檢測結(jié)腸病灶組織培養(yǎng)上清中相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)?；蛐酒瑱z測并應(yīng)用系統(tǒng)生物學(xué)分析平臺MetaCore分析腸癌小鼠MDSC中的異常表達(dá)基因。隨后用酪

3、氨酸激酶抑制劑—索拉菲尼(Sorafenib)或VEGF單抗阻斷VEGF信號，觀察CAC發(fā)生早期小鼠結(jié)腸固有層中MDSC的比例變化和結(jié)腸病理改變，以及對CAC發(fā)展的影響。
　　結(jié)果:成功建立小鼠CAC模型，并根據(jù)多項評價指標(biāo)確定建模后1月和3月為CAC早期和晚期。在CAC形成過程中，小鼠體內(nèi)MDSC(Gr-1+CD11b+)細(xì)胞數(shù)量明顯增多，病灶部位MDSC的累積也非常明顯[CAC早期(1.32±0.04)％、CAC晚期(3.08

4、±0.29)％vs對照組(0.30±0.18)％，p＜0.05]，這些細(xì)胞高表達(dá)Arg-1和iNOS。與此相對應(yīng)的是，病灶部位L-精氨酸含量顯著降低[CAC早期(4.22±0.17)μg/ml、CAC晚期(2.95±1.08)μg/ml vs對照組(4.41±0.16)μg/ml，p＜0.05]。基因芯片檢測出CAC小鼠MDSC中異常表達(dá)基因1154個，其中上調(diào)642個，下調(diào)512個。進(jìn)一步的分析獲得多條與MDSC密切相關(guān)的基因和通路，

5、其中有一個抑癌基因—血小板來源生長因子樣受體蛋白基因（platelet derived growth factor receptor like protein，pdgfrl）值得注意。此外，與對照組相比在CAC早期和晚期，病灶組織高表達(dá)VEGF，[CAC早期(1170±94.43) pg/ml、CAC晚期為(1117±71.92) pg/ml vs對照組(877.6±31.67) pg/ml，p＜0.05]。Sorafenib或VEGF

6、中和抗體的治療可顯著抑制病灶部位MDSC的累積。[索拉菲尼治療組:對照組(0.74±0.17)％、CAC+Sorafenib組(0.56±0.12)％vs CAC組(2.81±0.39)％，p＜0.05;VEGF抗體治療組:對照組(0.24±0.02)％、CAC+VEGFmAb組(2.09±0.05)％vs CAC組(3±0.07)％,p＜0.01]。
　　結(jié)論:MDSC在UC惡性轉(zhuǎn)化中具有重要作用，VEGF信號在CAC的形成過程