長(zhǎng)鏈非編碼RNAH19在胃癌干細(xì)胞中的表達(dá)及功能研究.pdf

1、[目的]
　　探討長(zhǎng)鏈非編碼RNA H19（lncRNA H19）在胃癌細(xì)胞系和胃癌干細(xì)胞中表達(dá)的差異性，及其對(duì)腫瘤干細(xì)胞特性及生物功能的影響，為研究胃癌的特異性靶向治療奠定基礎(chǔ)。
　　[方法]
　　采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法（qRT-PCR）檢測(cè)lncRNA H19在胃癌組織中的表達(dá)水平，通過無血清懸浮培養(yǎng)法從MGC-803胃癌細(xì)胞系中分離干細(xì)胞樣亞群，同時(shí)檢測(cè)lncRNA H19在MGC-803胃癌細(xì)胞系和瘤球細(xì)胞

2、中的表達(dá)水平，從而分析lncRNA H19與腫瘤干細(xì)胞的潛在聯(lián)系，在體外利用慢病毒包裝法將lncRNA H19干擾質(zhì)粒(siH19)和對(duì)照質(zhì)粒(con-H19)分別轉(zhuǎn)染入胃癌細(xì)胞，通過嘌呤霉素篩選穩(wěn)定細(xì)胞系，Real-time PCR檢測(cè)H19 mRNA的下調(diào)效果，瘤球形成實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的自我更新與增殖能力的改變，蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)、流式細(xì)胞術(shù)（FCM）檢測(cè)干細(xì)胞相關(guān)因子CD24、CD44的表達(dá)變化

3、，以此觀察lncRNA H19對(duì)胃癌干細(xì)胞生物學(xué)特性的影響，從而探討lncRNA H19在胃癌的發(fā)生、發(fā)展中的生物學(xué)作用。
　　[結(jié)果]
　　qRT-PCR結(jié)果顯示 H19在胃癌組織中的表達(dá)量較相應(yīng)的正常胃上皮組織顯著升高（P<0.05）；無血清懸浮培養(yǎng)的MGC-803瘤球細(xì)胞較其貼壁細(xì)胞顯著高表達(dá)H19 mRNA(P<0.01)；通過qRT-PCR驗(yàn)證了細(xì)胞的慢病毒包裝效果，結(jié)果顯示干擾組(siH19)的H19表達(dá)量顯著減

4、少（P<0.001）；基因干擾H19的表達(dá)后，MGC-803細(xì)胞干擾組較對(duì)照組在無血清培養(yǎng)基條件下的成瘤率明顯降低（P<0.05），平板克隆形成實(shí)驗(yàn)與瓊脂克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果也顯示干擾組的克隆形成能力與增殖能力較對(duì)照組下調(diào)(P<0.01)；熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)干細(xì)胞相關(guān)因子CD24、CD44在干擾組中表達(dá)下調(diào)（P<0.05）；Western blot結(jié)果顯示：用特異性siRNA干擾H19的表達(dá)后，胃癌細(xì)胞CD44蛋白表達(dá)水平減少；通過流式

5、細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)，下調(diào) MGC-803胃癌細(xì)胞的H19表達(dá)水平同時(shí)降低了CD24(+)CD44(+)的細(xì)胞百分比。
　　[結(jié)論]
　　胃癌組織較相應(yīng)胃正常上皮組織中存在著H19的高表達(dá),同時(shí)干細(xì)胞亞群中H19的表達(dá)高于胃癌組織。下調(diào)胃癌細(xì)胞的H19表達(dá)可以降低胃癌細(xì)胞的增殖力和克隆能力，同時(shí)降低成瘤能力及自我更新的干細(xì)胞特性。因此，本實(shí)驗(yàn)認(rèn)為lncRNA H19在胃癌干細(xì)胞特性方面的維持發(fā)揮著一定的作用，可能成為干預(yù)胃癌干