鹽酸吡格列酮對高糖誘導(dǎo)的大鼠腎小球系膜細胞氧化應(yīng)激及MCP-1表達的影響.pdf

1、目的：觀察鹽酸吡格列酮(PIO)對高糖(HG)誘導(dǎo)的大鼠腎小球系膜細胞(MCs)氧化應(yīng)激和單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)表達的影響,并討論其機制及與腎臟保護的關(guān)系。
　　方法：大鼠腎小球系膜細胞于細胞瓶中培養(yǎng),按實驗分組如下:
　?、貼G組:正常對照組(含10％胎牛血清低糖DMEM培養(yǎng)液葡萄糖濃度為5.6mmol/L);
　?、贖3組:高糖刺激組(含10%胎牛血清高糖DMEM培養(yǎng)液葡萄糖濃度為25mmol/L);<

2、br>　?、跴IO組:吡格列酮干預(yù)組;
　　P1組:高糖(25mmol/L)+吡格列酮(10-5mol/L)干預(yù);P2組:高糖(25mmol/L)+吡格列酮(10-6mol/L)干預(yù);P3組:高糖(25mmol/L)+吡格列酮(10-7mol/L)干預(yù)
　　各組細胞培養(yǎng)48h后收集細胞及上清液。每組指標均設(shè)6個重復(fù)組,不同濃度吡格列酮先干預(yù)48h。系膜細胞內(nèi)活性氧(ROS)水平應(yīng)用流式細胞儀法檢測;MCs上清液中的脂質(zhì)過氧化

3、物丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性采用比色法檢測,以反轉(zhuǎn)錄-PCR法(RT-RCR)檢測單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)mRNA表達,細胞上清液中MCP-1蛋白濃度采用ELLSA法檢測。
　　結(jié)果：
　　1腎小球系膜細胞可表達及合成MCP-1。
　　2吡格列酮對高糖刺激的MCs內(nèi)ROS水平的影響
　　與NG組(6.91±0.23)比較,H3組(46.8±1.5)細胞內(nèi)ROS生成量顯著增多,p<

4、0.01;與H3組比較,吡格列酮P1組(10.7±0.69)、P2組(28.3±1.84)及P3組(33.9±1.02)細胞內(nèi)ROS生成顯著降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義,p<0.05;P1、P2和P3組間比較差異也有統(tǒng)計學(xué)意義,p<0.05。
　　3吡格列酮對高糖刺激的MCs上清液中MDA水平的影響
　　與NG組(1.08±0.06)比較,H3組(1.70±0.08)細胞上清液中MDA含量顯著增多,p<0.01;與H3組比較,吡格

5、列酮P1組(1.19±0.07)、P2組(1.42±0.09)及P3組(1.54±0.08)細胞上清液中MDA含量顯著降低,但仍高于NG組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義,p<0.05;P1、P2和P3組間比較差異也有統(tǒng)計學(xué)意義,p<0.05。
　　4吡格列酮對高糖刺激的MCs上清液中SOD活性的影響
　　與NG組(19.13±0.74)比較,H3組(11.68±0.9)細胞上清液中SOD活性顯著降低,p<0.01;與H3組比較,吡格列酮

6、P1組(17.19±0.93)、P2組
　　(15.61±0.91)及P3組(13.49±0.64)細胞上清液中SOD活性顯著增高,但仍低于NG組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義,p<0.05;P1、P2和P3組間比較差異也有統(tǒng)計學(xué)意義,p<0.05。
　　5吡格列酮對高糖刺激的MCsMCP-1mRNA表達的影響
　　與NG組(0.3777±0.0213)比較,H3組(0.5378±0.033)細胞MCP-1mRNA表達明顯增強,p

7、<0.05;與H3組比較,吡格列酮P1組(0.4068±0.0219)、P2組(0.4537±0.0203)及P3組(0.4857±0.228)細胞MCP-1mRNA表達顯著降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義,p<0.05;P1、P2和P3組間比較差異也有統(tǒng)計學(xué)意義,p<0.05。
　　6吡格列酮對高糖刺激的MCsMCP-1蛋白分泌的影響
　　與NG組(42.58±8.21)比較,H3組(228.95±37.88)細胞上清液中MCP-1

8、蛋白濃度顯著增高,p<0.05;與H3組比較,吡格列酮P1組(85.36±19.21)、P2組(126.48±25.69)及P3組(162.35±32.92)細胞上清液MCP-1濃度顯著降低差異有統(tǒng)計學(xué)意義,p<0.05;P1、P2和P3組間比較差異也有統(tǒng)計學(xué)意義,p<0.05。
　　7相關(guān)分析
　　MCs內(nèi)ROS水平與細胞上清液中SOD活性呈顯著負相關(guān),(r=0.510,P=0.04);MCs內(nèi)ROS水平與細胞上清液中MD

9、A水平呈顯著正相關(guān),(r=0.958,P=0.00);MCs內(nèi)ROS水平與MCP-1mRNA表達呈顯著正相關(guān),(r=0.919,P<0.01);MCs內(nèi)ROS水平與細胞上清液中MCP-1蛋白濃度呈顯著正相關(guān),(r=0.955,P<0.01))。
　　結(jié)論：
　　1.腎小球系膜細胞可表達及合成MCP-1;
　　2.高糖可誘導(dǎo)大鼠MCs的ROS產(chǎn)生增多,MCP-1mRNA表達及蛋白含量增加,上清液中MDA含量顯著增高、SO