骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在腫瘤中的分化及超聲測定前列腺突入的臨床應(yīng)用.pdf

1、一、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外分化為肌纖維母細(xì)胞的研究 目的:探討腫瘤微環(huán)境對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）的趨化性以及MSCs在腫瘤微環(huán)境中分化為肌纖維母細(xì)胞的體外研究。 方法;于雄性新西蘭大白兔股骨大轉(zhuǎn)子處抽取骨髓約1ml，采用密度梯度離心法聯(lián)合貼壁培養(yǎng)法分離擴(kuò)增MSCs，用流式細(xì)胞儀檢測培養(yǎng)的MSCs的表面抗原。無菌方法摘取VX2瘤兔的新鮮腫瘤組織進(jìn)行原代培養(yǎng)擴(kuò)增，并收集其培養(yǎng)上清。采用Transwell法比較對照組、體積

2、分?jǐn)?shù)為30％和50％的VX2上清培養(yǎng)基對F2代MSCs的趨化性；根據(jù)Transwell結(jié)果，將F2代MSCs用體積分?jǐn)?shù)為30％VX2上清培養(yǎng)基刺激，分別在7天、14天時采用RT-PCR和Westernblot方法檢測肌纖維母細(xì)胞標(biāo)記物α-SMA和Vimentin的表達(dá)情況。 結(jié)果:MSCs細(xì)胞呈梭形，培養(yǎng)的F2代MSCs流式鑒定結(jié)果為CD29（+），CD44（+），CD45（-），CD106（+）； VX2細(xì)胞呈多邊形或長梭形；

3、Transwell試驗中發(fā)現(xiàn)：鏡下體積分?jǐn)?shù)為30％VX2上清組穿過基質(zhì)膠的細(xì)胞數(shù)明顯多于對照組和50％組，這一結(jié)果被隨后進(jìn)行的比色測定結(jié)果進(jìn)一步證實；RT-PCR和Westernblot結(jié)果均發(fā)現(xiàn)：用30％VX2上清培養(yǎng)基刺激7天后，MSCs表達(dá)α-SMA和Vimentin的水平均明顯強于對照組（P<0.05）；而刺激14天后，MSCs表達(dá)α-SMA和Vimentin的水平均進(jìn)一步增強（P<0.05）。 結(jié)論:腫瘤微環(huán)境對MSC

4、s有一定的趨化性，MSCs可以在腫瘤微環(huán)境的刺激下分化為肌纖維母細(xì)胞。 意義:本實驗在一定程度上表明：在腫瘤微環(huán)境的誘導(dǎo)下，MSCs能夠進(jìn)入腫瘤組織并在其刺激下轉(zhuǎn)化為肌纖維母細(xì)胞，這可能是MSCs促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展的一個途徑；MSCs可能是腫瘤/癌活化肌纖維母細(xì)胞的一個重要來源。 二、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在腫瘤微環(huán)境中分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞的研究 目的:探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中的作用及其是否可以

5、轉(zhuǎn)化為血管內(nèi)皮細(xì)胞。 方法:隨機將20只雄性新西蘭大白兔分為2組：實驗組和對照組。每只動物抽取骨髓培養(yǎng)MSCs后，采用VX2瘤塊包埋法建立膀胱腫瘤模型。模型建立1周后，實驗組回輸DAPI標(biāo)記的自身F2代MSCs，而對照組回輸培養(yǎng)液。在模型建立2、4周后分別用經(jīng)腹超聲方法檢測腫瘤大小。4周后處死所有動物，采用雙重免疫熒光方法檢測實驗組中植入的MSCs能否轉(zhuǎn)化為血管內(nèi)皮細(xì)胞。另外，將實驗組和對照組膀胱腫瘤標(biāo)本做成石蠟切片，每個動物隨

6、機抽取3張，HE染色后，計數(shù)高倍視野下（×400）血管數(shù)目，比較兩組動物腫瘤組織血管密度的差異。體外實驗中原代培養(yǎng)MSCs和VX2細(xì)胞，收集新鮮VX2上清，實驗組是用體積分?jǐn)?shù)為10％胎牛血清、30％VX2上清的低糖DMEM培養(yǎng)的F2代MSCs，對照組是用體積分?jǐn)?shù)為10％胎牛血清的低糖DMEM培養(yǎng)的F2代MSCs，分別在7天、14天時采用Westernblot方法比較兩組細(xì)胞血管內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記物CD146的蛋白表達(dá)情況。 結(jié)果:實驗

7、組和對照組在2周時腫瘤最大徑分別是0.77±0.15cm和0.71±0.15cm，兩組間沒有明顯統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。4周時實驗組腫瘤最大徑（3.82±0.94cm）明顯大于對照組（2.28±0.54cm）（P<0.05）。實驗組冰凍切片顯示DAPI/CD146雙重免疫熒光陽性的細(xì)胞存在于血管腔表面，表明植入的MSCs已轉(zhuǎn)化為血管內(nèi)皮細(xì)胞。實驗組和對照組的腫瘤組織血管密度分別是10.1±0.70/0.2m㎡和8.24±0.81/0

8、.2m㎡，兩組間存在明顯統(tǒng)計學(xué)差異（P<0.05）；體外實驗中Westernblot結(jié)果發(fā)現(xiàn)：實驗組的MSCs用體積分?jǐn)?shù)30％VX2上清培養(yǎng)基刺激7天后，CD146的蛋白表達(dá)水平明顯強于對照組（P<0.05）；而刺激14天后，CD146蛋白表達(dá)水平進(jìn)一步增強（P<0.05）。 結(jié)論:MSCs能夠在腫瘤微環(huán)境中分化為血管內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)血管生成，這可能是其促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展的主要途徑。 三、超聲測定膀胱內(nèi)前列腺突入在良性前列腺

9、增生患者中的應(yīng)用 目的:探討良性前列腺增生（BPH）患者膀胱內(nèi)前列腺突入（IPP）程度測定對膀胱出口梗阻及膀胱功能的預(yù)測與評價。 方法:分析206例初次就診的良性前列腺增生患者的資料，根據(jù)經(jīng)腹超聲測量的IPP值將患者分為兩組：明顯突入組（IPP>1cm）和不明顯突入組（IPP≤1cm），分析兩組間臨床資料及尿動力學(xué)檢查結(jié)果間的關(guān)系。 結(jié)果:臨床資料顯示：明顯突入組（sIPP）和不明顯突入組（nsIPP）患者在前列

10、腺體積（73.7±35.9cm3 vs62.8±36.5 cm3）、前列腺特異性抗原（PSA）（1.81±0.67ng/mlvs1.64±0.36 ng/ml）、剩余尿量（290.2±217.2ml vs228.2±167.9ml）、急性尿潴留（33.3％ vs18.0％）及膀胱小梁化（23.1％ vs11.7％）五個方面的差異均有明顯統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。尿動力學(xué)檢查結(jié)果顯示：兩組患者的排尿期最大尿流率（Qmax）（7.6±4.

11、1ml/s vs9.1±3.6ml/s）、膀胱過度活動癥發(fā)生率（82.1％ vs17.2％）、膀胱順應(yīng)性降低率（35.9％ vs12.5％）、最大逼尿肌壓力（Pdet.max）（109.8±84.9cmH2O vs84.9±44.1 cmH2O）及膀胱出口梗阻指數(shù)（BOOI）（75.2±27.1 vs65.9±34.6）間的差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。 結(jié)論:IPP可以作為初步預(yù)測和評價膀胱出口梗阻程度及膀胱功能的一項指