LPS通過TLR4上調(diào)THP-1細(xì)胞SR-PSOX的表達(dá)及其對脂質(zhì)的吞噬.pdf

1、目的:研究TLR4與SR-PSOX之間的關(guān)系,探討LPS促動脈粥樣硬化的可能機(jī)制。
　　方法:THP-1細(xì)胞經(jīng)160nmol/L佛波酯孵育24小時(shí),誘導(dǎo)成貼壁的巨噬細(xì)胞后,加入不同處理因素。實(shí)驗(yàn)1,用0ng/ml,1ng/ml,10ng/ml,100ng/ml,1000ng/ml的LPS處理 THP-1細(xì)胞,逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（reverse transcription polymerase chain reaction,RT-P

2、CR)檢測細(xì)胞 SR-PSOXmRNA表達(dá),選出 LPS最佳作用濃度;再以最佳濃度LPS分別孵育THP-1細(xì)胞0h,3 h,6 h,12 h,24 h,RT-PCR法檢測細(xì)胞SR-PSOXmRNA表達(dá),選出LPS最佳作用時(shí)間。實(shí)驗(yàn)2,根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康姆譃閮刹糠?(1)經(jīng)不同因素處理后,檢測THP-1細(xì)胞SR-PSOX表達(dá)情況,實(shí)驗(yàn)分為PBS組,LPS組,IgG+LPS組,TLR4抗體+LPS組。10ug/ml抗體預(yù)處理THP-1細(xì)胞2小時(shí),

3、LPS孵育細(xì)胞3小時(shí),應(yīng)用RT-PCR和Western Blot檢測細(xì)胞SR-PSOXmRNA及蛋白質(zhì)表達(dá);(2)經(jīng)不同因素處理后,檢測細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積情況,實(shí)驗(yàn)分為 oxLDL組,LPS+oxLDL組,IgG+LPS+oxLDL組,TLR4抗體+LPS+oxLDL組,10ug/ml抗體預(yù)處理THP-1細(xì)胞2小時(shí),LPS孵育細(xì)胞3小時(shí),再與30μg/mloxLDL孵育24小時(shí),高效液相色譜法與油紅O染色觀察細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)含量。實(shí)驗(yàn)3,根據(jù)實(shí)驗(yàn)

4、目的分為兩部分,(1)經(jīng)不同因素處理后,檢測THP-1細(xì)胞TLR4表達(dá)情況,實(shí)驗(yàn)分為PBS組,LPS組,IgG+LPS組,SR-PSOX抗體+LPS組,2ug/ml抗體預(yù)處理THP-1細(xì)胞2小時(shí),LPS孵育細(xì)胞3小時(shí),應(yīng)用RT-PCR法和Western Blot檢測細(xì)胞TLR4mRNA與蛋白質(zhì)表達(dá)情況。(2)經(jīng)不同因素處理后,檢測細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積情況,實(shí)驗(yàn)分為oxLDL組,LPS+oxLDL組,IgG+LPS+oxLDL組,SR-PSOX

5、抗體+LPS+oxLDL組,2ug/ml抗體預(yù)處理 THP-1細(xì)胞2小時(shí),LPS孵育細(xì)胞3小時(shí),再與30ug/ml oxLDL孵育24小時(shí),高效液相色譜法與油紅O染色觀察細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)含量。
　　結(jié)果:LPS上調(diào)SR-PSOX的mRNA表達(dá),最佳作用濃度為100ng/ml,最佳作用時(shí)間為3小時(shí)。應(yīng)用TLR4抗體封閉其功能后,SR-PSOXmRNA和蛋白表達(dá)下調(diào),與LPS組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05);油紅O染色細(xì)胞內(nèi)紅染脂滴

6、減少,高效液相顯示脂質(zhì)含量降低,與LPS+oxLDL組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。應(yīng)用SR-PSOX抗體封閉其功能后,TLR4的mRNA及蛋白表達(dá)與阻斷前相比均有一定程度降低,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;高效液相色譜與油紅O染色均表明細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)含量減少,與LPS+oxLDL組相比,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。
　　結(jié)論:1.LPS刺激可以上調(diào)THP-1細(xì)胞SR-PSOX的表達(dá);用TLR4抗體后,LPS上調(diào)THP-1細(xì)胞S