定量免疫PCR檢測(cè)血清MG7-Ag新方法的建立及其意義.pdf

1、【背景】：胃癌是常見的消化道惡性腫瘤,在所有惡性腫瘤中，其死亡率排第二位，早期發(fā)現(xiàn)和診斷胃癌對(duì)胃癌的治療和預(yù)后至關(guān)重要。以往的胃癌標(biāo)志物如CEA、CA50等對(duì)胃癌診斷的敏感性和特異性均較差，早期診斷受到限制。因此尋找新的組織學(xué)、細(xì)胞學(xué)、血清學(xué)胃癌特異性抗原對(duì)胃癌的診斷和治療具有重大意義。
　　本實(shí)驗(yàn)室樊代明教授在上世紀(jì)八十年代研制出的一系列特異性較好的胃癌單克隆抗體，并命名為MG系列[1]，其對(duì)胃癌的敏感性和特異性均較高，尤其以M

2、G7最引人關(guān)注。本室相繼建立了血清學(xué)檢測(cè)MG7抗原的ELISA方法和免疫PCR方法，使胃癌早期診斷的敏感性和特異性得到極大提高。由于免疫PCR是通過瓊脂糖凝膠電泳對(duì)PCR終產(chǎn)物是進(jìn)行半定量的檢測(cè)，不能實(shí)現(xiàn)精確定量，特異性受到限制。將實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù)應(yīng)用于免疫PCR，通過實(shí)時(shí)定量PCR反應(yīng)過程中原始模板量的變化分析胃癌患者血清中MG系列抗原含量，使血清抗原含量得以實(shí)現(xiàn)精確定量,本研究以期通過定量免疫PCR技術(shù)實(shí)現(xiàn)對(duì)血清中MG7-Ag的精

3、確定量檢測(cè)，有望為胃癌的診斷新的方法學(xué)依據(jù)。
　　【目的】：建立以定量免疫PCR檢測(cè)血清胃腫瘤相關(guān)MG7-Ag的新方法，分析血清中MG7-Ag的含量，通過確定胃癌患者與健康人群血清中MG7-Ag的相對(duì)含量，為胃癌血清診斷提供支持。
　　【方法】：1.通過細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)復(fù)蘇MG7雜交瘤細(xì)胞和MGb2雜交瘤細(xì)胞，制備MG7單抗和MGb2單抗。2.以光敏生物素標(biāo)記MG7單抗和質(zhì)粒。3.應(yīng)用實(shí)時(shí)定量免疫PCR技術(shù)檢測(cè)胃癌患者血清中MG

4、系列抗原含量。
　　【結(jié)果】：建立了定量免疫PCR方法，其穩(wěn)定性較好，對(duì)胃癌診斷的敏感性和特異性均較高。50μL血清MGAgs相對(duì)含量，胃癌組為21890±6579個(gè)MKN45細(xì)胞，健康對(duì)照組為2844±914個(gè)MKN45細(xì)胞，胃癌組與健康對(duì)照組兩組間存在明顯差異，P<0.01具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義
　　【結(jié)論】：以PCR管(聚丙烯材料)作為載體對(duì)MGb2抗體具備良好吸附性，非特異性較低，可以作為蛋白質(zhì)載體進(jìn)行免疫反應(yīng)，同時(shí)，MGb