B型利鈉肽對(duì)脂多糖誘導(dǎo)的THP-1源性巨噬細(xì)胞表型偏移的影響.pdf

1、目的：心肌梗死發(fā)生后，梗死區(qū)域立即出現(xiàn)中性粒細(xì)胞滲入，隨后單核巨噬細(xì)胞的浸潤(rùn)在心肌梗死后炎癥及修復(fù)中均發(fā)揮重要作用。研究發(fā)現(xiàn)，巨噬細(xì)胞主要分為促炎表型M1和抗炎表型M2，在心梗后隨著炎癥的進(jìn)程表現(xiàn)為時(shí)間性表型偏移，如果促炎表型過度，將導(dǎo)致炎癥范圍擴(kuò)大、組織損傷過度、修復(fù)不良、瘢痕增多等不良反應(yīng)。B型利鈉肽(BNP)是主要由心室肌細(xì)胞分泌的具有多種功能的多肽，其受體廣泛存在于心、腎、腦、血管等各種組織和細(xì)胞中，通過NPRA/GC/cGMP

2、/PKG通路調(diào)節(jié)多種生理功能。急性心肌梗死后，心室組織內(nèi)BNPmRNA含量急劇升高，血漿BNP含量也同步增加。有研究表明在心肌梗死后長(zhǎng)期和短期外源性應(yīng)用重組人B型利鈉肽預(yù)防和減少心室重構(gòu)，改善心臟功能等有益結(jié)果。但BNP對(duì)心肌梗死后心室重構(gòu)的影響其機(jī)制所在，仍是需要探索的問題。
　　 方法：
　　 1、脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的THP-1源性巨噬細(xì)胞的制備；
　　 2、RT-PCR法測(cè)定巨噬細(xì)胞激不同活時(shí)間與BNP及

3、其受體mRNA表達(dá)的關(guān)系；
　　 3、酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定BNP作用LPS誘導(dǎo)的THP-1源性巨噬細(xì)胞后，其細(xì)胞內(nèi)的cGMP濃度的變化；
　　 4、RT-PCR法測(cè)定BNP不同用藥濃度對(duì)LPS誘導(dǎo)的THP-1源性巨噬細(xì)胞表型標(biāo)志(代表M1型巨噬細(xì)胞的標(biāo)志有TNF-a、MCP-1、RANTES、IL-6、IL-12等，代表M2型巨噬細(xì)胞的標(biāo)志有CCL-18、IL-10、TGF-β等)mRNA表達(dá)水平的影響；
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4、、酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定BNP對(duì)LPS誘導(dǎo)的THP-1源性巨噬細(xì)胞表型標(biāo)志蛋白表達(dá)水平的影響。
　　 結(jié)果：
　　 1、THP-1細(xì)胞LPS誘導(dǎo)前后形態(tài)學(xué)變化：THP-1細(xì)胞誘導(dǎo)分化前，細(xì)胞呈圓形，懸浮生長(zhǎng)；加入100nmol/L佛波酯(PMA)處理48h后，換新培養(yǎng)液，并加入1ng/mLLPS，孵育3h后，觀察細(xì)胞狀態(tài)，細(xì)胞由懸浮生長(zhǎng)變?yōu)橘N壁生長(zhǎng)，變形或伸出偽足，成巨噬細(xì)胞狀，即為誘導(dǎo)成功。
　　 2、BNP及其相

5、關(guān)受體在脂多糖誘導(dǎo)的THP-1源性巨噬細(xì)胞中的表達(dá)：LPS誘導(dǎo)THP-1為巨噬細(xì)胞，其BNP與其1型受體(NPR1)在mRNA水平上表達(dá)量出現(xiàn)明顯上升，并于加入LPS3h后達(dá)到高峰。
　　 3、外源性BNP可引起脂多糖誘導(dǎo)的THP-1源性巨噬細(xì)胞中的cGMP明顯升高。
　　 4、外源性BNP劑量依賴性的使脂多糖誘導(dǎo)的THP-1源性巨噬細(xì)胞M1型向M2型在mRNA水平上發(fā)生表型偏移。
　　 5、外源性BNP劑量依賴

6、性的使脂多糖誘導(dǎo)的THP-1源性巨噬細(xì)胞M1型向M2型在蛋白水平上發(fā)生表型偏移。
　　 結(jié)論：
　　 1、巨噬細(xì)胞被激活后BNP表達(dá)增多，其主要作用受體也明顯上調(diào)。表明BNP在巨噬細(xì)胞接到的自分泌和旁分泌作用中可能發(fā)揮一定作用。
　　 2、巨噬細(xì)胞激活后，外源性的BNP可能通過其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，使細(xì)胞內(nèi)cGMP含量升高，進(jìn)而發(fā)揮其調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄、蛋白表達(dá)等作用。
　　 3、巨噬細(xì)胞激活后，外源性的BNP能劑量