人磷酸二酯酶4B2基因的克隆和異源表達研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、磷酸二酯酶(PDEs)通過催化cAMP和cGMP水解，調節(jié)細胞內第二信使的水平。磷酸二酯酶4特異地水解cAMP，主要存在于中性粒細胞，嗜酸性粒細胞，T淋巴細胞，巨噬細胞等免疫和炎癥細胞中。PDE抑制劑可用于治療多種疾病，因此極具市場價值。PDE4選擇性抑制劑可以用于治療哮喘，慢性阻塞性肺疾病，抑郁，阿爾茨海默氏癥、帕金森氏病等重大疾病。本論文中，克隆并用大腸桿菌和酵母菌表達人磷酸二酯酶482。所表達的蛋白將用于建立高通量篩選模型篩選其抑

2、制劑。 人白血病單核細胞中加入1ng/ml LPS于37℃孵育3小時后，提取總RNA。以總RNA為模扳，用RT-PCR的方法得到人PDE482編碼區(qū)的基因片段。核苷酸序列分析表明擴增的片段與GenBank報道的序列相差三個堿基。通過定點突變得到了正確的編碼序列。將cDNA分別插入表達載體PET-32a，pPIC9K和pYeDP60扣，并在大腸桿菌和酵母菌中表達。篩選陽性轉化子，誘導表達后得到重組蛋白。Western blot表明

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