獲得性純紅細(xì)胞再生障礙性貧血γδT細(xì)胞克隆性分析.pdf

1、研究目的：通過對獲得性純紅細(xì)胞再生障礙性貧血(PRCA)患者γδT細(xì)胞的T細(xì)胞受體(TCR)γ基因重排分析，探討在獲得性PRCA的患者體內(nèi)是否存在克隆性增生的γδT細(xì)胞。 對象及方法：采用針對TCR-γ鏈基因的特異性引物和一步法RT-PCR擴(kuò)增14例PRCA患者及10例正常人外周血γδT細(xì)胞的TCR-γ基因的CDR3區(qū)，并利用瓊脂糖電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳及Bandleader3.0凝膠圖像分析檢測CDR3區(qū)長度的變化以判斷γδ

2、T細(xì)胞的克隆性，部分呈克隆性表型的病例通過直接測序證實(shí)。 結(jié)果：1、2％瓊脂糖電泳結(jié)果顯示：經(jīng)RT-PCR，14例PRCA患者及10例正常對照均擴(kuò)增獲得230bp(Ⅵ亞家族)或240bp(Ⅶ亞家族)左右的陽性條帶。 2、8％聚丙烯酰胺凝膠電泳及凝膠圖像分析顯示：14例PRCA患者中有4例PRCA患者(病例1和病例3的Ⅵ亞家族，病例4和病例8的Ⅶ亞家族)出現(xiàn)較濃集的單個條帶，凝膠圖像分析顯示為一基底較窄的銳利高峰與一些矮峰

3、，代表寡克?。黄溆嗟?0例PRCA的患者和10例正常對照均表現(xiàn)為模糊寬帶或在模糊寬帶的背景上出現(xiàn)多條較濃集的條帶，凝膠圖像分析顯示灰度呈高斯分布的寬峰或多峰，代表多克隆。 3、結(jié)合臨床資料顯示，(1)采血時臨床狀況：3例初發(fā)患者中1例為寡克隆，2例為多克??；6例緩解者中有1例為寡克隆，其余均為多克?。?例復(fù)發(fā)患者中有2例為寡克隆，其余均為多克?。?2)環(huán)孢素治療療效：11例環(huán)孢素治療有效的患者中有4例出現(xiàn)寡克隆，3例環(huán)孢素治療無

4、效的患者均為多克隆。 4、2例寡克隆(病例1的Ⅵ亞家族和病例4的Ⅶ亞家族)RT-PCR產(chǎn)物送測序，結(jié)果與NCBI數(shù)據(jù)庫相比較，證實(shí)了這兩例患者外周血中克隆性增生的γδT細(xì)胞的存在。 結(jié)論：1、10/14例獲得性PRCA的患者外周血γδT細(xì)胞呈多克隆增生，提示γδT細(xì)胞在PRCA的發(fā)病中主要是一種反應(yīng)性增生。 2、4/14例PRCA患者外周血γδT細(xì)胞呈寡克隆性增生，這4例患者對環(huán)孢素治療有效，是否存在γδT細(xì)胞的