利用生物素-鏈霉親和素進行骨髓間充質(zhì)干細胞表面標記的實驗研究.pdf

1、目的：
　　1、通過生物素-鏈霉親和素反應(yīng)體系建立一種簡單可行的細胞表面化學(xué)修改方法。
　　2、評價生物素和鏈霉親和素進行骨髓間充質(zhì)干細胞表面標記的效率。
　　3、探討此種化學(xué)共價結(jié)合方法對骨髓間充質(zhì)干細胞生物學(xué)功能的影響,為這項技術(shù)在促進干細胞在急性腎損傷中歸巢中的研究奠定實驗基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1、通過全骨髓培養(yǎng)法得到第三代骨髓間充質(zhì)干細胞備用，并采用流式細胞儀鑒定BMSCs；
　　2、以磺化

2、生物素-N-羥基琥珀酰亞胺、生物素、鏈霉親和素為材料，通過共價結(jié)合的化學(xué)方法將粘附分子配體SLeX裝備到BMSCs表面；
　　3、通過熒光顯微鏡評估化學(xué)修改方法進行BMSCs表面標記的效率；
　　4、采用臺盼藍染色法檢測化學(xué)修改方法對BMSCs細胞活性的影響；
　　5、CCK-8比色法檢測化學(xué)修改方法對BMSCs的細胞增殖功能影響；
　　6、成脂、成骨誘導(dǎo)檢測化學(xué)修改方法對BMSCs多分化功能的影響。
　　

3、結(jié)果：
　　1、骨髓間充質(zhì)干細胞表面標志物鑒定：通過全骨髓培養(yǎng)法培養(yǎng)2周，可得到第三代BMSCs，采用流式細胞儀進行BMSCs細胞表型鑒定，結(jié)果如下：CD9099.9％；CD2999.8%,CD340.1%，CD450%，符合BMSCs表型
　　2、化學(xué)修改方法效率的評估：通過生物素及鏈霉親和素進行BMSCs表面標記，細胞表面修改成功率達（87.8±3.1%），明顯比對照組B+S(33.2±1.3)%（P<0.001）和P+

4、S組（6.4±1.3%）（P<0.001）高；
　　3、化學(xué)修改方法對BMSCs生物學(xué)特性的影響：BMSCs細胞活性在BNHS化學(xué)修飾細胞后24h和48h細胞活性為83%和76%，CCK-8檢測細胞的增殖功能發(fā)現(xiàn)，BNHS修飾后72h細胞增殖功能受一定影響。BNHS修飾的細胞和PBS處理后BMSCs均能被成功能誘導(dǎo)分化，成脂誘導(dǎo)23后進行油紅染色均可見大量脂質(zhì)沉淀，成骨誘導(dǎo)23天后茜素紅染成骨分化細胞均可見明顯深紅色礦化結(jié)節(jié)。