電化學(xué)治療對(duì)宮頸癌HELA細(xì)胞離子通道的影響及其與細(xì)胞生長(zhǎng)的關(guān)系.pdf

1、目的：通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)研究電化學(xué)治療作用對(duì)宮頸癌細(xì)胞系離子通道的影響及其與細(xì)胞生長(zhǎng)調(diào)亡之間的關(guān)系，進(jìn)一步探討電化學(xué)治療宮頸癌的作用機(jī)制。方法：采用活細(xì)胞計(jì)數(shù)繪制生長(zhǎng)曲線以觀察在(5V，10C)的電化學(xué)治療劑量作用后，陰極、陽(yáng)極以及(5V，10C)電化學(xué)治療作用后并添加了K離子通道開(kāi)放劑的陰極、陽(yáng)極細(xì)胞與未經(jīng)過(guò)治療的宮頸癌細(xì)胞生長(zhǎng)趨勢(shì)的變化。噻唑蘭染色法(MTT)比較以上各組細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率；全細(xì)胞膜片鉗模式測(cè)定經(jīng)(5V，10C)電化學(xué)治療后

2、陰極及陽(yáng)極的細(xì)胞與未經(jīng)治療的宮頸癌細(xì)胞相比，其K離子通道電流的變化。RT-PCR(逆轉(zhuǎn)錄PCR)測(cè)定經(jīng)(5V，10C)，(10V，10C)，(10V，5C)，(5V，5C)的電化學(xué)治療劑量的作用后，陰極及陽(yáng)極細(xì)胞與未經(jīng)過(guò)治療的宮頸癌細(xì)胞相比較，其鉀離子通道蛋白基因KCNJ16，鈣離子通道蛋白基因CACNAlG，以及氯離子通道蛋白基因CLCN3mRNA的表達(dá)情況；半定量PCR(凝膠電泳成像分析法)測(cè)定并計(jì)算各電化學(xué)劑量陰極細(xì)胞及陽(yáng)極細(xì)胞K

3、CNJl6，CACNAIG，CLCN3mRNA的相對(duì)表達(dá)值，并比較其差異。結(jié)果：(1)控制時(shí)間影響因素后，(5V，10C)電化學(xué)治療后陰極組及陽(yáng)極組，(5V，10C)電化學(xué)治療后并添加K離子通道開(kāi)放劑的陰極組及陽(yáng)極組，與空白對(duì)照組細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果之間比較有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)，由生長(zhǎng)曲線圖可知，空白對(duì)照組隨時(shí)間變化細(xì)胞數(shù)逐漸遞增；(5V，10C)治療后陰極及陽(yáng)極組，細(xì)胞數(shù)隨時(shí)間變化始終呈遞減趨勢(shì)，與其它三組區(qū)別明顯；(5V，10

4、C)電化學(xué)治療后并添加K離子通道開(kāi)放劑的陰極組及陽(yáng)極組細(xì)胞數(shù)先減少，第三天后逐漸增加，最后與正常對(duì)照組細(xì)胞生長(zhǎng)趨勢(shì)一致。 (2)在宮頸癌HELA細(xì)胞中，利用全細(xì)胞膜片鉗模式記錄到持續(xù)激活的外向鉀電流。此類(lèi)電流激活速度較快，失活速度很慢，具有外向整流特性，大約從0mV左右處開(kāi)始出現(xiàn)可分辨的鉀電流，之后，隨著指令電壓的階躍攀升，通道開(kāi)放逐漸增加，表現(xiàn)為外向電流值逐漸增大，故具有電壓依賴性。經(jīng)(5V，10C)電化學(xué)治療劑量作用后的陰極

5、及陽(yáng)極與對(duì)照組細(xì)胞相比，細(xì)胞外向整流的鉀通道被明顯抑制，其中在鉗制電壓為10mv，20mv，30mv，40mv，50mv時(shí)，各試驗(yàn)組與對(duì)照組相比，K離子通道電流強(qiáng)度均有下降，從Ⅰ-Ⅴ曲線可知，與對(duì)照組相比，經(jīng)電化學(xué)治療后，陰極及陽(yáng)極組Ⅰ-Ⅴ曲線下移。(3)半定量PCR結(jié)果顯示：，對(duì)照組與經(jīng)電化學(xué)治療(5V，10C)陰極及陽(yáng)極，(10V，10C)陽(yáng)極KCNJl6相對(duì)表達(dá)值相比，治療后KCN/16表達(dá)下降，差別顯著(P<0.05)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)

6、意義；下降程度：(5V，10C)陽(yáng)極>(10V，10C)陰極和陽(yáng)極，差別顯著(P<0.05)，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，后二者之間的差別無(wú)顯著差異(p>0.05)，對(duì)照組與其余各組差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與對(duì)照組相比，經(jīng)(5V，lOC)電化學(xué)治療后，陰極處CACNAlG相對(duì)表達(dá)升高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，(P<0.05)，余各組無(wú)顯著差異；(5C，10V)治療后陰極，(10C，10V)治療后陰極細(xì)胞組與對(duì)照組及其余各組細(xì)胞相比，CLCN3表達(dá)增高，差別有顯著

7、意義(P<0.05)，其中此2組間的差別亦有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，前者該基因表達(dá)增高較后者顯著，余各組與對(duì)照組相比，該基因表達(dá)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)論：(1)、細(xì)胞生長(zhǎng)及抑制實(shí)驗(yàn)表明，(5V，10C)的電化學(xué)治療能使宮頸癌細(xì)胞的生長(zhǎng)明顯受到抑制，而治療后加入鉀離子通道開(kāi)放劑，能部分抵消了電化學(xué)對(duì)宮頸癌細(xì)胞的這種抑制作用。 (2)、全細(xì)胞膜片鉗記錄模式在宮頸癌HELA細(xì)胞中引出外向整流性鉀離子通道電流，該電流在接受了電化學(xué)治療后受

8、到抑制，抑制趨勢(shì)與電化學(xué)作用后細(xì)胞生長(zhǎng)受限相附，因此認(rèn)為電化學(xué)治療可抑制外向整流性鉀離子通道，這種抑止作用為電化學(xué)治療抗腫瘤作用的機(jī)制之一。 (3)、電化學(xué)治療到達(dá)一定劑量強(qiáng)度下，可以引起KCNJ16、CNCL3、CACNAlG的改變，其中，KCNJ16為內(nèi)向整流性鉀通道的編碼基因，其改變主要發(fā)生在陰極，與電化學(xué)的治療機(jī)制相關(guān)；CACNA1G和CNCL3分別為T(mén)型鈣通道的編碼基因和容量調(diào)控氯離子通道的編碼基因，在陰極處可有表達(dá)的