大鼠肝癌細胞高增殖亞群生物學(xué)與耐藥特征實驗研究.pdf

1、目的：探討大鼠肝癌中是否存在增殖能力不同細胞，并初步研究高增殖能力細胞亞群生物學(xué)特征，比較與肝癌細胞藥敏特征的差異。 方法：1、有限稀釋法單克隆培養(yǎng)大鼠肝癌細胞，找出不同可增殖的肝癌細胞亞群(HSG-1、HSG-2)，并對他們的細胞生長特征、細胞周期分布、成瘤能力以及持續(xù)培養(yǎng)下分化能力等生物學(xué)特征進行研究。2、取HSG-2與肝癌細胞，阿霉素(0.2μg/mL)、氟尿嘧啶(5μg/mL)及順鉑(1μg/mL)作用72h后，SRB法

2、分別檢測化療藥物對HSG-2與肝癌細胞的抑制率。 結(jié)果：(1)共有6只大鼠培養(yǎng)出比較穩(wěn)定的能持續(xù)增殖亞群，其中穩(wěn)定出現(xiàn)的2個亞群分別命名為HSG-1與HSG-2；(2)HSG-2細胞倍增時間、最大增生倍數(shù)、細胞周期分布均有顯著性差異。(3)HSG-2細胞成瘤比例為100％，1/10對數(shù)稀釋后，成瘤比例為50％，與對應(yīng)亞群原密度接種為0的比較，P=0.001；P=0.023，均有顯著性差異。(4)HSG-2細胞亞克隆培養(yǎng)，產(chǎn)生的子

3、代克隆集落出現(xiàn)了形態(tài)異質(zhì)性的細胞，同樣產(chǎn)生梭形及多角形細胞；將多角形克隆集落轉(zhuǎn)種植到24孔板擴大培養(yǎng)可見到同上兩種不同形態(tài)的細胞集落，而HSG-1細胞亞克隆培養(yǎng)未能產(chǎn)生多角形子代細胞。HSG-2亞克隆的子代多角形細胞種植到裸鼠皮下，成瘤率也達100％(6/6)；而HSG-2子代梭形細胞種植到裸鼠皮下未見成瘤。(5)阿霉素，氟尿嘧啶與順鉑對肝癌大鼠HSG-2抑制率與對肝癌細胞抑制率比較有顯著性差異，t值與P值分別為：t=4.321，P=0

4、.002；t=4.965，P=0.001與t=4.285，P=0.002。(6)阿霉素、氟尿嘧啶、順鉑對肝癌大鼠HSG-2的IC50與對肝癌細胞IC50比較有顯著性差異，t值與P值分別為：t=10.604，P<0.001；t=5.642，P<0.001與t=9.470，P<0.001。 結(jié)論：HSG-2細胞增殖能力低、致瘤能力強，有一定分化能力，具備大鼠肝癌干細胞的初步特征?；熕幬飳Ω伟┐笫驢SG-2抑制小于對肝癌細胞抑制，提