絨癌耐藥細(xì)胞系5-FU-FUDR代謝通路的相關(guān)研究.pdf

1、目的：
　　 絨癌是好發(fā)于育齡期婦女的高度惡性腫瘤，化療是目前主要的治療方法。對(duì)化療耐藥是治療失敗的主要原因。腫瘤耐藥可以是先天性的，也可以是化療后獲得的。而絨癌耐藥多數(shù)為獲得性耐藥，其耐藥機(jī)制主要包括藥理學(xué)機(jī)制和細(xì)胞機(jī)制。本研究基于5-FU/FUDR在細(xì)胞內(nèi)的代謝通路，觀察通路中相關(guān)基因的表達(dá)與絨癌細(xì)胞耐藥的關(guān)系。
　　 方法：
　　 應(yīng)用CCK-8測(cè)定濃度梯度遞增法和間歇誘導(dǎo)法建立的絨癌耐藥細(xì)胞株的耐藥指數(shù)，

2、MTT法測(cè)定各細(xì)胞株的生長(zhǎng)曲線，群體細(xì)胞的倍增時(shí)間。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定不同細(xì)胞株的細(xì)胞周期。應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法測(cè)定各耐藥細(xì)胞株和親本細(xì)胞株5-FU/FUDR代謝通路相關(guān)基因(DPD、TP、TK和TS)的表達(dá)。應(yīng)用SELDITOFMS方法初步尋找間歇誘導(dǎo)法終濃度耐藥細(xì)胞株和親本細(xì)胞株間是否存在顯著性差異表達(dá)的蛋白或者蛋白譜。
　　 結(jié)果：
　　 (1)與親本細(xì)胞株相比，耐藥細(xì)胞株有形態(tài)的改變，P-gp糖蛋白表達(dá)的增

3、加，耐藥性的增加，細(xì)胞周期分析，各期所占比例無(wú)顯著性差異，細(xì)胞生長(zhǎng)速度和倍增時(shí)間也沒(méi)有明顯的差異。(2)與親本細(xì)胞株相比，5-FU和FUDR耐藥細(xì)胞株DPD基因表達(dá)下降，不同濃度耐藥株間的差異并不明顯。(3)與親本細(xì)胞株相比，5-FU和FUDR耐藥細(xì)胞株TP基因表達(dá)下降。其中FUDR高濃度耐藥株表達(dá)下降更加顯著。(4)與親本細(xì)胞株相比，5-FU和FUDR耐藥細(xì)胞株TK基因表達(dá)增加，其中間歇誘導(dǎo)高濃度耐藥株表達(dá)增高更加顯著。(5)與親本細(xì)

4、胞株相比，5-FU和FUDR耐藥細(xì)胞株TS基因表達(dá)增加，間斷誘導(dǎo)高濃度耐藥株表達(dá)增高更加顯著。(6)與親本細(xì)胞株以及FUDR高濃度(6.25mg/ml和1.25mg/ml)耐藥細(xì)胞株相比，5-FU的B濃度(0.25mg/ml)耐藥株存在3075、8401、9250Da三種異常表達(dá)的蛋白峰。
　　 結(jié)論：
　　 DPD、TP、TK和TS是5-FU/FUDR細(xì)胞內(nèi)代謝通路中相關(guān)重要酶，其基因在耐藥細(xì)胞株和親本細(xì)胞株中表達(dá)存在