鼻咽癌中STGC3基因與mTOR通路相關(guān)蛋白質(zhì)表達(dá)分析及意義.pdf

1、目的：采用敲低STGC3基因表達(dá)的NP69細(xì)胞系，檢測mTOR、pmTOR及下游效應(yīng)分子S6、pS6、4E-BP1、p4E-BP1蛋白的表達(dá)水平，進(jìn)一步驗(yàn)證mTOR相關(guān)蛋白分子在鼻咽癌細(xì)胞系及組織中的表達(dá)與意義，分析 mTOR相關(guān)蛋白分子與STGC3間的關(guān)系，探明STGC3蛋白的相關(guān)分子網(wǎng)絡(luò)，為闡明鼻咽癌發(fā)病分子機(jī)制提供新的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)、蛋白質(zhì)免疫印跡(Western blot)檢

2、測NP69、pRNAi-U6/Neo-scramble-NP69、pRNAi-U6.1/shRNA/STGC3/NP69、CNE1、CNE2細(xì)胞系，鼻咽癌組織及非鼻咽癌組織中mTOR信號通路相關(guān)分子mTOR、pmTOR、S6、pS6、4E-BP1及p4E-BP1的mRNA和蛋白表達(dá)情況；應(yīng)用免疫組化SP法，檢測上述蛋白質(zhì)分子在鼻咽癌組織中的表達(dá)。
　　結(jié)果：RT-PCR結(jié)果顯示，pRNAi-U6.1/shRNA/STGC3/NP6

3、9、CNE1、CNE2細(xì)胞系和鼻咽癌組織中mTOR、S6的mRNA表達(dá)水平增高，；而4E-BP1 mRNA表達(dá)降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。NP69、pRNAi-U6.1/shRNA/STGC3/NP69、pRNAi-U6/Neo-scramble-NP69、CNE1、CNE2細(xì)胞系中mTOR mRNA的表達(dá)強(qiáng)度分別為0.371±0.047，0.806±0.036，0.352±0.026，0.838±0.041，0.805±

4、0.025；S6 mRNA的表達(dá)強(qiáng)度分別為0.881±0.055，1.340±0.057，0.843±0.041，1.405±0.089，1.351±0.073；4E-BP1 mRNA的表達(dá)強(qiáng)度分別為0.451±0.035，0.250±0.024，0.457±0.030，0.275±0.025，0.302±0.039； mTOR、S6、4E-BP1在鼻咽癌組織中的mRNA表達(dá)強(qiáng)度分別為0.689±0.044，0.898±0.031，0.

5、341±0.027，在非鼻咽癌組織中的表達(dá)強(qiáng)度分別為0.409±0.046，0.489±0.051，0.659±0.038。
　　Western blot結(jié)果顯示，pRNAi-U6.1/shRNA/STGC3/NP69、CNE1、CNE2細(xì)胞中mTOR、pmTOR、pS6、p4E-BP1蛋白表達(dá)水平增高，4EBP1蛋白的表達(dá)降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。但S6在上述各細(xì)胞系中的表達(dá)無顯著差異(p>0.05)，NP69、

6、pRNAi-U6.1/shRNA/STGC3/NP69、pRNAi-U6/Neo-scramble-NP69、CNE1、CNE2細(xì)胞系中mTOR蛋白的表達(dá)強(qiáng)度分別為0.487±0.037，0.719±0.054，0.606±0.049，0.819±0.036，0.905±0.049；pmTOR蛋白的表達(dá)強(qiáng)度分別為0.207±0.037，0.918±0.036，0.304±0.039，0.964±0.039，0.941±0.061；S6表

7、達(dá)強(qiáng)度分別為0.863±0.038，0.888±0.043，0.798±0.049，0.901±0.043，0.909±0.048。pS6蛋白的表達(dá)強(qiáng)度分別為0.233±0.015，0.418±0.023，0.201±0.025，0.360±0.022，0.332±0.027；4E-BP1蛋白的表達(dá)強(qiáng)度分別為0.902±0.050，0.598±0.034，0.903±0.023，0.608±0.032，0.661±0.023；p4E-B

8、P1蛋白的表達(dá)強(qiáng)度分別為0.291±0.014，0.454±0.022，0.277±0.025，0.484±0.019，0.510±0.026。
　　鼻咽癌組織中mTOR、pmTOR、S6、pS6、p4E-BP1蛋白的表達(dá)增高，4E-BP1的表達(dá)降低。鼻咽癌組織中mTOR、pmTOR、S6、pS6、4E-BP1、p4E-BP1的蛋白表達(dá)強(qiáng)度分別為0.745±0.028，0.573±0.041，0.900±0.033，0.427±0

9、.024，0.494±0.026，0.769±0.024；非鼻咽癌組織中的表達(dá)強(qiáng)度分別為0.531±0.037，0.423±0.017，0.606±0.027，0.213±0.023，0.920±0.025，0.435±0.026，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。
　　免疫組化結(jié)果顯示：mTOR、pmTOR、S6、pS6、4E-BP1、p4E-BP1蛋白主要表達(dá)于鼻咽癌細(xì)胞胞漿內(nèi)，呈淡黃色至棕黃色。鼻咽癌組織中mTOR、pm

10、TOR、S6、pS6、p4EBP1蛋白陽性表達(dá)率增高，4E-BP1蛋白陽性表達(dá)率降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。鼻咽癌組織中mTOR、pmTOR、S6、pS6、4E-BP1、p4EBP1蛋白陽性表達(dá)率分別為83.33％(10/12)、75%(9/12)、66.66%(8/12)、83.33%(10/12)、33.33%(4/12)、91.66%(11/12)，非鼻咽癌組織中陽性表達(dá)率分別為30.76%(4/13)、38.46%

11、(5/13)、23.07%(3/13)、38.46%(5/13)、83.33%(10/13)、33.33%(4/13)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.敲低STGC3基因在NP69細(xì)胞的表達(dá)，NP69細(xì)胞中mTOR、pmTOR、pS6、p4E-BP1蛋白表達(dá)增高，4E-BP1蛋白表達(dá)降低，STGC3低表達(dá)可導(dǎo)致 NP69細(xì)胞中mTOR通路的激活。
　　2.鼻咽癌組織及細(xì)胞系中mTOR、pmTO