TNF-α或-和曲安奈德對(duì)人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞氧化損傷的影響.pdf

1、目的： 探討腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）或/和曲安奈德（triamcinolone acetonide，TA）對(duì)人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞（cultured human retinal pigment epithelial cells-19，ARPE-19）活性氧（reactive oxygen species，ROS）、線粒體DNA損傷標(biāo)記物二氫鳥嘌呤（8-oxo-7，8-dihyd

2、roguanine，8-oxoG）及DNA損傷修復(fù)標(biāo)記物8-羥基鳥嘌呤DNA糖苷酶（human8-oxoguanine DNA glycosylasel，hOGG1）表達(dá)的影響。 方法： 體外培養(yǎng)人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞ARPE-19，培養(yǎng)液中加入TNF-α干預(yù)ARPE-19，分為50μg·L-1、100μg·L-1、200μg·L-1三個(gè)濃度，分別作用12h、24h，以2’，7’-二氯熒光素二乙酸酯（2’，7’-dichl

3、orofluorescin-diacetate，DCFH-DA）法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS的產(chǎn)生情況；培養(yǎng)液中加入TA干預(yù)ARPE-19，分為40μg·L-1、400μg·L-1、4000μg·L-1三個(gè)濃度，分別作用12h、24h，以DCFH-DA法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS的產(chǎn)生情況。以TNF-α（100μg·L-1）、TA（400μg·L-1）分別干預(yù)ARPE-1924h及以TNF-α（100μg·L-1）干預(yù)24h再以TA（400μg·L-1）干

4、預(yù)12h，以DCFH-DA法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS的產(chǎn)生情況，并以免疫細(xì)胞化學(xué)（immunocytochemistry，ICC）方法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)8-oxoG的表達(dá)情況，以蛋白免疫印跡法（Western Blot）檢測(cè)胞漿中hOGG1的表達(dá)情況。 結(jié)果： DCFH-DA法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)ROS顯示：①TNF-α（50μg·L-1、100μg·L-1、200μg·L-1）干預(yù)ARPE-1912h、24h后，細(xì)胞內(nèi)ROS表達(dá)量明顯增加（P

5、<0．01），以100μg·L-1的濃度干預(yù)時(shí)ROS表達(dá)水平最高，每組濃度下12、24h兩時(shí)間點(diǎn)ROS表達(dá)量無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0．05），但各濃度24h ROS表達(dá)量均有增加的趨勢(shì)。②TA（40μg·L-1、400μg·L-1、4000μg·L-1）干預(yù)ARPE-1912h、24h，40μg·L-1、400μg·L-1這兩組在12h、24h ROS的表達(dá)量和空白對(duì)照組無明顯差異（P>0．05），但表達(dá)量有降低的趨勢(shì)，4000μg·L-1

6、組在12h、24h均出現(xiàn)ROS表達(dá)量增加（P<0．01）。 免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)顯示：①以TNF-α（100μg·L-1）干預(yù)ARPE-1924h，8-oxoG表達(dá)量明顯增加（P<0．01）。②以TA（400μg·L-1）干預(yù)ARPE-1924h，8-oxoG的表達(dá)無明顯變化（P>0．05）。 蛋白免疫印跡法檢測(cè)顯示：①以TNF-α，（100μg·L-1）干預(yù)ARPE-1924h發(fā)現(xiàn)hOGG1表達(dá)量明顯增加（P<0．01）。

7、②以TA（400μg·L-1）干預(yù)ARPE-1924h，hOGG1的表達(dá)無明顯變化（P>0．05）。 TNF-α（100μg·L-1）干預(yù)ARPE-1924h再以TA（400μg·L-1）干預(yù)12h，結(jié)果顯示ROS、8-oxoG的表達(dá)比TNF-α（100μg·L-1）單獨(dú)干預(yù)組明顯降低（P<0．01），hOGG1的表達(dá)比TNF-α（100μg·L-1）單獨(dú)干預(yù)組明顯增加（P<0．01）。 結(jié)論： ①TNF-α能