水稻OsRACK1的遺傳轉(zhuǎn)化與功能研究.pdf

1、RACK1作為WD40蛋白超家族成員首先在動(dòng)物中被發(fā)現(xiàn)，哺乳動(dòng)物中RACK1是支架蛋白。作為高度保守的細(xì)胞內(nèi)銜接蛋白，RACK1參與多條信號(hào)通路。在哺乳動(dòng)物中RACK1除了與PKC結(jié)合外，在蛋白翻譯、組織發(fā)育、晝夜節(jié)律、神經(jīng)反射、腫瘤形成中發(fā)揮重要作用。在植物中，RACK1參與多種生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程的調(diào)控，包括植物激素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、葉和根的生長(zhǎng)、干旱和鹽脅迫反應(yīng)、水淹逆境、種子萌發(fā)、H2O2的產(chǎn)生、先天免疫反應(yīng)、植物對(duì)病原真菌反應(yīng)、核糖體的聯(lián)系、

2、蛋白翻譯和miRNA合成等過(guò)程，RACK1在模式植物擬南芥中被廣泛研究，但由于RACK1的功能在不同的植物中存在差異及組織特異性，所以應(yīng)當(dāng)在不同的植物中繼續(xù)對(duì)RACK1展開(kāi)研究。在本研究中，我們克隆了水稻OsRACK1A和OsRACK1B基因，構(gòu)建了帶有熒光標(biāo)簽的轉(zhuǎn)基因植株。主要結(jié)果如下:
　　1.T1代獲得了OsRACK1A-eGFP和OsRA CK1B-eGFP過(guò)表達(dá)轉(zhuǎn)基因水稻，通過(guò)Basta抗性篩選、western blot

3、蛋白鑒定、實(shí)時(shí)熒光定量PCR鑒定以及激光共聚焦檢測(cè)綠色熒光蛋白，證實(shí)已獲得OsRA CK1A-eGFP和OsRA CK1B-eGFP過(guò)表達(dá)轉(zhuǎn)基因水稻株系。并且通過(guò)激光共聚焦觀察綠色熒光蛋白標(biāo)簽的亞細(xì)胞定位，證實(shí)OsRACK1A，OsRACK1B在整個(gè)細(xì)胞中均有分布。
　　2.利用western blot對(duì)野生型水稻籽粒發(fā)育過(guò)程中OsRACK1A蛋白進(jìn)行表達(dá)分析，結(jié)果表明，在水稻籽粒發(fā)育過(guò)程中OsRACK1A不斷地積累，而且其積累量

4、非常大，據(jù)此推測(cè)，OsRACK1A很有可能在籽粒的發(fā)育過(guò)程或者籽粒萌發(fā)過(guò)程中扮演著非常重要的角色。另外，本研究證明了籽粒發(fā)育過(guò)程中OsRACK1A與淀粉結(jié)構(gòu)可能不存在直接聯(lián)系。
　　3.OsRACK1A干擾表達(dá)、過(guò)表達(dá)轉(zhuǎn)基因株系以及野生型水稻抽穗時(shí)間存在差異，OsRACK1A干擾表達(dá)轉(zhuǎn)基因株系先抽穗，其次是野生型對(duì)照，OsRACK1A過(guò)表達(dá)株系最后抽穗，干擾表達(dá)株系與過(guò)表達(dá)株系抽穗時(shí)間至少相差10天。此結(jié)果暗示，OsRACK1A可