水稻OsRACK1的遺傳轉化與功能研究.pdf

1、RACK1作為WD40蛋白超家族成員首先在動物中被發(fā)現(xiàn)，哺乳動物中RACK1是支架蛋白。作為高度保守的細胞內銜接蛋白，RACK1參與多條信號通路。在哺乳動物中RACK1除了與PKC結合外，在蛋白翻譯、組織發(fā)育、晝夜節(jié)律、神經反射、腫瘤形成中發(fā)揮重要作用。在植物中，RACK1參與多種生長發(fā)育過程的調控，包括植物激素信號轉導、葉和根的生長、干旱和鹽脅迫反應、水淹逆境、種子萌發(fā)、H2O2的產生、先天免疫反應、植物對病原真菌反應、核糖體的聯(lián)系、

2、蛋白翻譯和miRNA合成等過程，RACK1在模式植物擬南芥中被廣泛研究，但由于RACK1的功能在不同的植物中存在差異及組織特異性，所以應當在不同的植物中繼續(xù)對RACK1展開研究。在本研究中，我們克隆了水稻OsRACK1A和OsRACK1B基因，構建了帶有熒光標簽的轉基因植株。主要結果如下:
　　1.T1代獲得了OsRACK1A-eGFP和OsRA CK1B-eGFP過表達轉基因水稻，通過Basta抗性篩選、western blot

3、蛋白鑒定、實時熒光定量PCR鑒定以及激光共聚焦檢測綠色熒光蛋白，證實已獲得OsRA CK1A-eGFP和OsRA CK1B-eGFP過表達轉基因水稻株系。并且通過激光共聚焦觀察綠色熒光蛋白標簽的亞細胞定位，證實OsRACK1A，OsRACK1B在整個細胞中均有分布。
　　2.利用western blot對野生型水稻籽粒發(fā)育過程中OsRACK1A蛋白進行表達分析，結果表明，在水稻籽粒發(fā)育過程中OsRACK1A不斷地積累，而且其積累量

4、非常大，據此推測，OsRACK1A很有可能在籽粒的發(fā)育過程或者籽粒萌發(fā)過程中扮演著非常重要的角色。另外，本研究證明了籽粒發(fā)育過程中OsRACK1A與淀粉結構可能不存在直接聯(lián)系。
　　3.OsRACK1A干擾表達、過表達轉基因株系以及野生型水稻抽穗時間存在差異，OsRACK1A干擾表達轉基因株系先抽穗，其次是野生型對照，OsRACK1A過表達株系最后抽穗，干擾表達株系與過表達株系抽穗時間至少相差10天。此結果暗示，OsRACK1A可