氧糖剝奪誘導(dǎo)的膠質(zhì)疤痕離體模型的構(gòu)建.pdf

1、背景和目的:腦缺血后星形膠質(zhì)細(xì)胞激活成為反應(yīng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞,并進(jìn)一步形成膠質(zhì)疤痕,抑制軸突再生,影響神經(jīng)功能恢復(fù)。目前尚無(wú)模擬腦缺血引起的離體膠質(zhì)疤痕模型,本實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖墙⑷碧侨毖?Oxygen-Glucose Deprivation,OGD)誘導(dǎo)的離體膠質(zhì)疤痕模型,為更好的研究腦缺血后膠質(zhì)疤痕的形成機(jī)制及為尋找促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)的靶點(diǎn)或相關(guān)藥物提供便利。
　　 方法:體外培養(yǎng)的大鼠原代星形膠質(zhì)細(xì)胞經(jīng)OGD處理6h,分別在再灌后0

2、h、24h和48h檢測(cè)各類(lèi)星形膠質(zhì)激活及疤痕形成的指標(biāo),包括利用MTT法和5-溴脫氧尿核苷(5-Bromodeoxyuridine,BrdU)標(biāo)記新生細(xì)胞數(shù)量法觀察細(xì)胞增殖情況,利用細(xì)胞免疫化學(xué)或免疫印記的方法考察膠質(zhì)原纖維酸性蛋白(Glial Fibrillary Acidic Protein,GFAP)的表達(dá)和硫酸軟骨素類(lèi)蛋白聚糖neurocan、phosphacan的表達(dá)。并將經(jīng)OGD處理的星形膠質(zhì)細(xì)胞與大鼠胚胎皮層神經(jīng)元共培養(yǎng)2

3、4h,觀察對(duì)神經(jīng)元突起生長(zhǎng)的影響。
　　 結(jié)果:在再灌24h,OGD處理的星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖明顯,GFAP表達(dá)顯著上調(diào),BrdU標(biāo)記的新生細(xì)胞數(shù)明顯增加,膠質(zhì)疤痕特異性標(biāo)記蛋白neurocan表達(dá)呈顯著上調(diào),而phosphacan的表達(dá)在再灌注后呈先下降后恢復(fù)的動(dòng)態(tài)變化。同時(shí),在共培養(yǎng)模型中,將OGD處理的星形膠質(zhì)細(xì)胞在再灌0h時(shí)與神經(jīng)元共培養(yǎng),神經(jīng)元突起長(zhǎng)度比對(duì)照組明顯增長(zhǎng);在再灌24h時(shí)進(jìn)行共培養(yǎng),兩組間無(wú)明顯變化;而在再灌4