“超級細菌”NDM-1抑制劑篩選與體外抗菌活性測定.pdf

1、2010年印度，歐洲，巴基斯坦，美國，中國等多國出現(xiàn)一種新型廣譜耐藥細菌—超級細菌NDM-1，其引起傳染病爆發(fā)，臨床上缺乏有效治療抗生素，而給人類的生命健康帶來重大威脅，它的出現(xiàn)也把人類濫用抗生素造成細菌耐藥性這個問題推向風口浪尖。超級細菌NDM-1可以編碼新德里金屬β-內(nèi)酰胺酶(New Delhi metallo-β-actamase1，NDM-1)，此酶能夠分解青霉素類、頭孢菌素類、碳青霉烯類等臨床上使用的大部分抗生素。它引發(fā)疫情大

2、爆發(fā)主要是因為編碼酶的基因位于游離于細菌基因的質(zhì)粒(140kb)上，致使基因blaNDM-1在細菌間快速傳播。
　　 新德里金屬β-內(nèi)酰胺酶晶體結(jié)構(gòu)的解析闡述了酶的三維結(jié)構(gòu)和作用方式，在確立其三維結(jié)構(gòu)的基礎上，研究針對其三維結(jié)構(gòu)的藥物發(fā)現(xiàn)，以及針對此靶點的高通量藥物篩選和對篩選得到的有效抑制劑進行體外抗菌活性實驗得到有抑制作用的化合物，對于先導化合物的發(fā)現(xiàn)和改造提供有力的實驗方向和數(shù)據(jù)。
　　 本實驗構(gòu)建新德里金屬β-內(nèi)

3、酰胺酶三個不同截短（Gly42-Arg270、Gly47-Arg270、Gly29-Arg270）的重組表達載體，經(jīng)過親和層析、離子交換柱和凝膠過濾層析等純化方法純化獲得95％純度目的蛋白NLP1和NLP2;通過高通量藥物篩選獲得40種有抑制活性的化合物，其中IC50最高值可達1.51±0.21μM，并對其中7種化合物進行了體外抗菌活性實驗，L-12表現(xiàn)出的體外抗菌效果最好，MIC達到16μg/mL，說明在蛋白水平有良好抑制作用的化合物