枯草芽孢桿菌S-16抑制核盤菌形成活性物質(zhì)的鑒定及其相關(guān)功能基因的克隆.pdf

1、向日葵菌核病是由核盤菌(Sclerotinia sclerotiorum(Lib)de Bary.)侵染所引起的一種向日葵毀滅性病害。目前，抗病品種選育、農(nóng)業(yè)防治、化學(xué)防治等對該病害均無有效防治效果。因此本課題組從生物防治著手，對向日葵菌核病的防治進(jìn)行了系列的研究。以課題組已分離得到的，對核盤菌（S.sclerotiorum）有顯著抑菌效果的枯草芽孢桿菌S-16為材料，對其抗菌活性物質(zhì)的理化性質(zhì)、氣體抑菌物質(zhì)的組分、不同的培養(yǎng)條件對核盤

2、菌生長影響等進(jìn)行研究;并利用質(zhì)粒pHV1249（包含mini-Tn10）進(jìn)行電擊轉(zhuǎn)化，構(gòu)建突變子庫;同時對突變子的生物膜的形成能力進(jìn)行了研究。目的是找到抑菌物質(zhì)產(chǎn)生的相關(guān)基因，為枯草芽孢桿菌工程菌的改造提供一定的理論依據(jù)。具體研究結(jié)果如下：
　?、艠?gòu)建了3000個突變子庫，并從中篩選到了3株喪失抑菌能力的突變子;同時也篩選到1株喪失產(chǎn)生氣體抑菌物質(zhì)的突變子;從隨機(jī)挑選的200株突變菌株中找到6株喪失形成生物能力的菌株。
　　

3、⑵抗菌活性物質(zhì)理化性質(zhì)的研究。40 mL（100 mL三角瓶）的裝液量，分別以葡萄糖和牛肉浸膏為碳、氮源時最有利于抑菌物質(zhì)的產(chǎn)生，同時S-16的抑菌粗提物的抑菌活性最高;抑菌物質(zhì)的熱穩(wěn)定性較高，對蛋白酶較為穩(wěn)定，較耐酸不耐堿，紫外照射處理對于抑菌活性的影響不明顯。根據(jù)以上結(jié)論，初步推斷枯草芽抱桿菌S-16的抑菌物質(zhì)的主要成分為脂肽類物質(zhì)。
　?、翘骄繗怏w抑菌物質(zhì)的組分。(1)1-Butanamine，N-methyl-（N-甲基正

4、丁胺）、2-Hexynoic acid（乙炔酸）、3-Butenamide（正丁胺）、Cyclobutanol（環(huán)丁醇）、2-Octanamine（正辛胺）和Benzothiazole，2-methyl-（2-甲基苯并噻唑）能夠完全抑制核盤菌菌絲的生長。(2) Formamide，N-ethyl-N-phenyl-（N，N-二甲基甲酰胺）、Piperazine，2-methyl-（2-甲基丙酰胺）影響菌絲正常生長，造成菌絲黃化，但是并不

5、影響菌核形成。(3) Ethyne，fluoro-（十二烷基甲銨）和3，3-Dimethyl-4-methylamino-butan-2-one（3，3-二甲基-4-甲氨基丁酮），對核盤菌菌絲和菌核影響較小，只是造成菌絲稀疏，但是不會影響菌核的形成。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，抑菌氣體中含有多個可以抑制核盤菌菌絲和菌核形成的成分。
　?、炔煌囵B(yǎng)條件對核盤菌生長的影響。核盤菌生長最適的培養(yǎng)基是PSA，最適的碳源、氮源分別為蔗糖和硝酸銨，在以碳酸