microbacteriumsp.中關(guān)鍵羰基還原酶的分離純化及性質(zhì)研究

1、武漢科技大學(xué)碩士學(xué)位論文Microbacterium sp.中關(guān)鍵羰基還原酶的分離純化及性質(zhì)研究姓名：羅莉申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生物化工指導(dǎo)教師：楊忠華20120524第1 I 頁 武漢科技大學(xué) 碩士學(xué)位論文A b s t r a c tC 址m a l c o h o l s a r e i m p o r t a n t m e m e d i a t e s t o s y n m e s i z e s i n g l e e

2、 n 鋤t i o m e r i c p u r ep h a 冊(cè)a C e u t i c a l ．A s y n 吼e t r i c r e d u c t i o no f p m ．c 1 1 i r a lk e t o n e s t op r o d u c e c l l i 】嘣a l c o h o l sc a t a l y z e db yW 1 1 0 l ec e l lo ro x i d o r

3、e d u c t a s eh a Sb e c o m ea r e s e a r c hh o tf i e l d i n a s y m m e t r i cs Ⅵ1 廿1 e s i s ．T od i s c o V e r 也em e c h 砌s mf o rw h o l e - c e l lc 砌y s i sa n dt o f i I l d ap o t e n t i 2 L l a p p l i

4、a b l ee n z m e f o rp r a c t i c a l 印p l i c a t i o n ，t l l i s w o r k f o c u s o n i s o l a t i n g m e k e y c 矗b o n y l r e d l l C t a s e 五∞m施c ，．D 6 口c 胞r 脅聊s p ．，a I l d i l Ⅳe s t i g a t i n g t h ee n

5、 巧m a t i cp r o p e r t i e s 鋤di t sb i o i 血n I l a t i c s ．7 n l em a 證c o I l t e n ：t sa r ea s f o l l o 、ⅣS ：A t F i r s t ，a p 謝f - y i l l g t e c h n o l o g y f o r i s o l a t i l l g 也e k e y c a r b o n y

6、 l r e d u c t a s e 舶m 廿1 e朋￥盯D 6 口c 飽，．玩ms p ．w a Sd e V e l o p e df o r 如r c l l e rs t u d yo fe 平a t i c c a t a l y s i sm e c h a l l i s m a tp r o t e i nl e v e l ．T h ec e l l sw e r ed i s i l l t e g r a t

7、e dw i t l l u l 缸a s o l l i c ．T h e n t 1 1 er e 出l c t a S ew a s e 芏1 r i c h e da 1 1 dp u r i f i e db y ( N } 1 4 ) 2 S 0 4 丘a c t i o n a l p r e c i p i t a t i o n ，a 1 1 i o n e x c h a I 瑪e c h r o m a t o 胂

8、p h y a n d g e l f i l 仃a t i o nc h r o m a t o g r a p h y ．T h et a r g e te 啦幔ew a sp 血f i e d 謝m a p 枷a 1 1 y8 1 f 0 1 d ，1 6 ．2 3U ／m g s p e c i a la c t i 訪t ) ，a I l d2 9 ．6 2 ％y i e l d ．ni sa d i m e r 謝t 1 1

9、 a I l 印p a r e n t m o l e c u l a r 、Ⅳc i g h to f 6 1 ．9 l ( D a ．n l e e 啕，1 1 1 a t i c p r o p 嘶i e s o ft l l e p 嘶f i e dr e d u 咖ew e r e a 】s o e v a J u a t e d ．n l e c 小o n y lr e m I C t a S e c o u l d c a

10、 t a l y z e t 1 1 e r e d u c t i o n o fk e t o n e s 謝廿lN A D Ha s c o e n z y m e ．T h eo p t i m a lt e I l l p e r a t u r ef o re 甲a t i c r e a c t i o nw a s4 0o Ca n d t h eo p t i I n a lp H f o r e n z y m a

11、t i cr e d u c t i o nw a s7 ．O ．T h ee n z y m ew a sw i mg o o dt h e 冊(cè)a 1s t a b i l i 夠a n dw a ss e n s i t i v eo f p Hc h a l l g e ．I ti s o m ys 切b l eb 咖e e n p H 6 ．0a l l d8 ．0 ．C u 2 + h a ds t r o n gc o u

12、l d r e m 缸k a b l y i m p r 0 V e t h e e n z y m e a c t i V i 夠．i n 址b i t o 巧e f f e c t o ne n z y m e a c t i v i t ) r ，w b j l eF e 2 +F o u r c a r b o n y l r e d u c t a s es e q u e n c e s ( c a r b o n y l

13、r e d u c t a s e 仔o m 國(guó)玎比如腳s f 腸J 括，T r E ⅧLI D ：B 2 Ⅺ4 6 ；c 舶o n y l r e d u 咖e 舶mC 口陽疣婦m q 矽D Z 砌g ，T r E M B LI D ：Q 9 C 4 8 3 ；c a r b o n y lr e d u c t a L s e 丘o mP 記而砌s f 護(hù)f 咖，T r E M [ B LI D ：A 3 G F 0 7 ；c a

14、r b o n y lr e d u c t a S e 仔o m 尸f c 乃覷s r 勿f f 婦，7 n ’E M 舊L I D ：A 3 G F 0 5 ) 、7 l ，e r e o b t a j n e d f 而m p r o t e i ns e q u e n c e d a t a b 2 L s e ．M u l t i p l e s e q u e n c ea l i 掣Ⅱn e n t ，a u c t

15、i V e s i t e sa I l d s e c o n d a r y 曲n J c t u r ep r e d i c t i o n 、Ⅳe r ea l s o e v a l u a t e d ．T h ef o u rt a r g e ts e q u e n c e sh a V e g o o d h o m o l o g y ．T 1 1 r e e o f m e t a r g e ts e q u

16、 e n c e s c o n t a i n a t y p i c a lc o n s e r v e d r e g i o nP S 0 0 0 6 1 a n d at ) ∞s i I l e a c 缸V e s i t e r e s i d u e i n s h o r t - c h a i nd e h y d r o g e n a s e s ／r e d u c t a S e s ‰i l ys i

17、g 咖e ．T h em a i ns e c o n d a r ) rs 仃咖o f t h ef o u rt 叫搿s e q u e n c e s a r er a I l d o mc o i l - b a s e d ，f o l l o w e db y t 1 1 ep - s h e e t a 1 1 d0 c - h e l i xa n d n o B - t u l m ．n l ew h o l e 、v

18、 o r kp r o V i d e s 也e f o u I l d a t i o nf o r d i s c o v e m gm em e c h a I l i s m o ft 1 1 e a c t i o nc a 伽y z e db ye n z y m e ．T h e r ei s i m p o r r t a n t r e a l i s t i cm e 砌n ga n dt h e o r e t i

19、 c a l v a l u et l l r o u g h t l l ec a r b o n y l r e d u c t a s ee 咖a t i c a n d i I l f - o m a t i c sp r o p e r t i e sr e s e a r c h ．K 呵w o r d s ：a 卿耐c r e d u c t i o n ；c a r b o n y lr e d u c t a s e