基于區(qū)與基因間區(qū)五條靶序列dna甲基化在甄別同卵雙生個體中的研究

1、 中文摘要基因區(qū)與基因間區(qū)五條靶序列D N A 甲基化在甄別同卵雙生個體中的研究摘 要目的：由于同卵雙胞胎( m o n o z y g o t i c t w i n s ，M Z ) 是由同一個受精卵發(fā)育而來，擁有相同或高度相似的D N A 序列，采用目前使用的個體識別技術(shù)，如短串聯(lián)重復(fù)( s h o r tt a n d e mr e p e a t ，S T R ) 分型技術(shù)、單核苷酸多態(tài)性( s i n g l e n u

2、c l e o t i d ep o l y m o p h i s m ，S N P ) 分型技術(shù)，m t D N A 分型技術(shù)等，均不能對其進(jìn)行區(qū)分，這給涉及M Z 的案件偵破帶來極大困難和阻力。表觀遺傳學(xué)是研究不涉及D N A 序列改變的基因表達(dá)和調(diào)控的可遺傳修飾，其中D N A 甲基化是最主要的一種表觀遺傳修飾。近年來研究發(fā)現(xiàn)M Z個體的D N A 甲基化存在差異，且本課題前期通過對I 對新生兒M Z 的全基因組甲基化譜的檢測，

3、發(fā)現(xiàn)在基因區(qū)和基因間區(qū)共有2 2 0 5 條D N A 甲基化差異序列，并篩選出1 1 3 條序列作為后續(xù)分析的候選位點。．本研究將從中進(jìn)一步篩選一些序列，利用焦磷酸測序測序技術(shù)對大樣本雙生子進(jìn)行Ⅸ蛆甲基化定量分析，探討各序列甲基化能否鑒別M Z ，評估其鑒別能力，并比較基因區(qū)和基因間區(qū)D N A 甲基化鑒別M Z 能力的大小，旨在為從遺傳學(xué)角度解決鑒別M Z 不同個體的難題提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，為建立可行的解決方案提供有價值的參考。方法：應(yīng)用

4、Q i a g e n 公司的Q t A a m p D N A B l o o d k i t 提取血液樣本的D N A ，應(yīng)用漱口水提取試劑盒( 泰州泰朗生物科技服務(wù)有限公司) 提取漱口水的全基因組D N A 。利用G o l d e n e y e D N A 身份鑒定系統(tǒng)的B A S I C 試劑盒檢測雙生子D N A 樣本的S T R 分型，以明確每對雙生子樣本的同異卵情況。應(yīng)用Z Y M O 公司的E ZD N A M e

5、t h y l a t i o n - G o l d 硒t 對基因組D N A 進(jìn)行重亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)化后的D N A 做為模板，分別擴增G S l 、G S 2 、G S 3 、I G S l 、I G S 2 五條靶序列。對擴增產(chǎn)物進(jìn)行單鏈純化，然后進(jìn)行焦磷酸測序，獲得五條序列2 0 個C p G 位點甲基化水平的定量數(shù)據(jù)。應(yīng)用S p e a r m a n 相關(guān)檢驗、p e a r s o n 相關(guān)分析、t 檢驗、f 檢驗、秩