青海棘球絳蟲mtDNA COI和NDI基因多態(tài)性分析.pdf

1、為進一步掌握青海省流行的棘球絳蟲線粒體DNA CO1基因和ND1基因的遺傳差異性,明確棘球絳蟲在青海省主要終末宿主的感染流行狀況。本文以采集的棘球絳蟲(Echinococcus)成蟲為研究對象,分別PCR擴增棘球絳蟲線粒體DNA CO1基因片段和ND1基因片段,直接測序進行基因多態(tài)性分析,旨在獲取相應的遺傳學差異信息。
　　本研究在青海省共搜集得感染野生狐貍和藏犬的棘球絳蟲分離株22株,經(jīng)PCR擴增和DNA測序,從22個棘球絳蟲分

2、離株中均擴增獲得363bp的mtDNA COI基因片段。該基因片段的聚類分析表明,在22個棘球絳蟲分離株中,10株分離株為細粒棘球絳蟲G1型(Echinococcus granulosus I, E.granulosus G1),8株為多房棘球絳蟲(Echinococcus multilocularis, E.m),4株為石渠棘球絳蟲(Echinococcus shiquicus,E.s)。10株多房棘球絳蟲株間同源性為99.2％~10

3、0%;8株多房棘球絳蟲株間同源性為98.7%~100%;4株石渠棘球絳蟲株間同源性為99.2%~99.8%。E.granulosus G1型與E.m型株間同源性為86.8%~89.2%,E.granulosusG1型與E.s型株間同源性為88.3%~89.5%,E.s型與E.m型株間同源性為88.1%~90.1%。E.granulosusG1型有6個不同的核苷酸序列,發(fā)現(xiàn)5個位點核苷酸發(fā)生堿基置換,約占分析位點總數(shù)的1.38%,基因序列

4、間差異值在0%~0.8%之間;E.m型,有4個不同的基因序列,發(fā)現(xiàn)5個位點核苷酸發(fā)生堿基置換,約占分析位點總數(shù)的1.38%,基因序列間列差異值在0%~1.3%之間;E.s型,有4個不同的基因序列,存在的6個核苷酸序列堿基置換位點,約占分析位點總數(shù)的1.65%,基因序列間列差異值在0.2%~0.8%之間。種內(nèi)變異率小于1.3%,種間變異率大于9.9%。
　　經(jīng)PCR擴增和DNA測序,從22個棘球絳蟲分離株中擴增獲得507bp的mtD

5、NA ND1基因片段。該基因片段序列的聚類分析,與CO1基因片段的聚類分析獲得了一致的結(jié)果。E.granulosus G1型,有5個不同的核苷酸序列,發(fā)現(xiàn)10個堿基置換位點,約占分析位點總數(shù)的1.97%,基因序列間差異值在0%~1.0%之間;E.multilocularis型,存在4個不同的基因序列,共8個堿基置換位點,約占分析位點總數(shù)的1.58%,序列間差異值在0%~0.7%之間;E.shiquicus型,存在4個不同的基因序列,共有