氧化應激在8-羥基喹啉銅致HepG2細胞的DNA損傷中的作用.pdf

1、目的：8-羥基喹啉銅（Copper 8-quinolinolate，CuQ）是一種銅離子殺菌劑，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中使用廣泛，可用于預防和控制真菌引起的農(nóng)業(yè)病害。CuQ性質(zhì)穩(wěn)定，將其噴灑于蔬菜、水果等農(nóng)作物表面，會有一定殘留。CuQ還是一種常用的防腐劑，與水果、蔬菜和其他食物直接接觸的木質(zhì)容器或包裝內(nèi)也常有CuQ存在。 國際癌癥研究機構(gòu)（International Agency for Research on Cancer，IARC）將

2、CuQ對人類致癌性歸為第三類，即現(xiàn)有證據(jù)尚不能就其對人類致癌性進行分類。CuQ對人類的致癌性有待進一步研究。已有體外實驗表明，在S-9存在的條件下，CuQ對TA97、TA100、TA102菌株具有致突變作用，提示CuQ可能具有遺傳毒性。肝臟是CuQ的主要代謝器官和蓄積部位，體內(nèi)動物實驗顯示CuQ可以造成肝臟損傷。本文試探討CuQ是否可以引起人源肝細胞的遺傳毒性及其相關機制。本研究選用人肝癌細胞系（HepG2）作為實驗系統(tǒng)。HepG2細胞

3、保留了人類正常肝實質(zhì)細胞的許多功能，還保留了生物轉(zhuǎn)化Ⅰ相酶和Ⅱ相酶的活性，被認為是檢測外來化合物遺傳毒性的理想細胞系。 本研究選用HepG2細胞作為實驗體系，探討CuQ所致人源肝細胞的DNA損傷及可能的機制，旨在為評估CuQ對人類健康的危害程度提供有價值的實驗依據(jù)。 方法：以HepG2細胞作為實驗系統(tǒng)。通過單細胞凝膠電泳（SCGE）試驗檢測細胞DNA損傷。為探討DNA損傷的可能機制，用可見光分光光度法測定過氧化氫酶活性，

4、以苯二醛（OPT）測定細胞內(nèi)谷胱甘肽（GSH）水平，用硫代巴比妥酸反應物（TBARS）測定法檢測細胞內(nèi)脂質(zhì)過氧化水平，以免疫印記法（western blot）檢測細胞核因子NF-κB的變化，以免疫組化方法檢測細胞內(nèi)8-羥基脫氧鳥苷（8-OHdG）的表達水平，采用DL-甲硫氨酸磺酰亞胺（BSO）干預法來評價細胞內(nèi)GSH水平對CuQ所致DNA損傷效應的影響。 結(jié)果：HepG2細胞與0．5μM-4μM的CuQ接觸1h后，DNA的遷移距

5、離明顯增加，且呈劑量依賴關系，提示CuQ可引起DNA鏈斷裂。4μM的CuQ可以明顯降低細胞內(nèi)過氧化氫酶活性。CuQ作用于HepG2細胞1h可引起細胞內(nèi)GSH的耗竭。2μM-4μM的CuQ可引起細胞內(nèi)TBARS增多。伴隨劑量的增加及染毒時間的延長，細胞核因子NF-κB由細胞漿逐漸轉(zhuǎn)移至細胞核。2μM-4μM的CuQ可引起細胞內(nèi)TBARS增多。1μM-4μM的CuQ作用于HepG2細胞3h后，8-OHdG表達水平增強，與對照組比較，其差別具