TPGS-b-(PCL-ran-PGA)載HIF-1αsiRNA的制備及其對鼻咽癌細(xì)胞生長的影響.pdf

1、目的：探討TPGS-b-(PCL-ran-PGA)納米粒載HIF-1αsiRNA在體外、體內(nèi)對鼻咽癌生長的影響。
　　方法：（1）采用復(fù)乳溶劑揮發(fā)法制備載HIF-1αsiRNA納米粒，檢測其粒徑、表面形態(tài)、包封率，并進(jìn)一步檢測載siRNA納米粒的體外釋放情況。
　　（2）觀察細(xì)胞攝取載siRNA納米粒的效果以及siRNA在細(xì)胞內(nèi)的分布情況，采用Real-time PCR和Western blot檢測細(xì)胞內(nèi)HIF-1α的表達(dá)水

2、平，MTT法檢測細(xì)胞增殖活性。
　?。?）在裸鼠皮下接種CNE-2建立移植瘤模型，瘤內(nèi)注射單純HIF-1αsiRNA、單純納米粒、載HIF-1α亂序siRNA納米?；蜉dHIF-1α siRNA納米粒，觀察移植瘤體積變化，測算瘤重及抑瘤率，采用Real-time PCR和Western blot檢測移植瘤HIF-1α的表達(dá)水平，光學(xué)顯微鏡下觀察組織病理學(xué)改變。
　　結(jié)果：（1）載siRNA納米粒的平均粒徑為275.72±2.9

3、4 nm，包封率為70.20±1.91％，表面形態(tài)呈球形，體外釋放實(shí)驗(yàn)顯示載siRNA納米粒具有緩釋性。
　?。?）納米粒包載的攜帶FAM熒光標(biāo)記的siRNA可被細(xì)胞攝取，siRNA分布在細(xì)胞質(zhì)以及細(xì)胞核周圍。載HIF-1αsiRNA納米粒轉(zhuǎn)染后能夠顯著抑制細(xì)胞HIF-1αmRNA和蛋白的表達(dá)。MTT實(shí)驗(yàn)顯示載HIF-1αsiRNA納米粒對CNE-2有明顯的抑制增殖作用，且隨著濃度的增加，效果更明顯。
　?。?）與單純HIF

4、-1αsiRNA治療組相比，單純納米粒、載HIF-1α亂序siRNA納米粒和載HIF-1αsiRNA納米粒治療組的抑瘤率分別為23.53%、28.63%和52.94%。與其他3組相比，載HIF-1αsiRNA納米粒治療組HIF-1αmRNA和蛋白表達(dá)水平明顯降低，腫瘤細(xì)胞凋亡壞死明顯增多。
　　結(jié)論：載HIF-1αsiRNA TPGS-b-(PCL-ran-PGA)納米粒能被鼻咽癌細(xì)胞攝取，顯著下調(diào)細(xì)胞內(nèi)HIF-1αmRNA和蛋白