Prrx1誘導(dǎo)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞對多西他賽耐藥的研究.pdf

1、【目的】：探討同源異型核基因1(Prrx1)誘導(dǎo)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞對多西他賽(Docetaxel)耐藥的影響。
　　【方法】：1.用Real-time PCR方法從MCF-7、BT-549和MDA-MB-468三種乳腺癌細(xì)胞中篩選出Prrx1低表達(dá)乳腺癌細(xì)胞株。
　　2.用定制的慢病毒載體感染篩選出的Prrx1低表達(dá)乳腺癌細(xì)胞株，Real-time PCR驗(yàn)證感染成功后，分別于熒光顯微鏡的白光和熒光下觀察

2、各組細(xì)胞形態(tài)變化。運(yùn)用Real-time PCR檢測波形蛋白與E-鈣黏蛋白的表達(dá)。
　　3.用Transwell法檢測Prrx1過表達(dá)對MCF-7細(xì)胞遷移能力的影響。
　　4.CCK-8檢測MCF-7細(xì)胞的IC50，并檢測 Docetaxel作用于實(shí)驗(yàn)組、空白對照組和陰性對照組24h后的IC50。
　　5運(yùn)用流式細(xì)胞術(shù)檢測Docetaxel作用于三組細(xì)胞24h后，Prrx1過表達(dá)對乳腺癌MCF-7細(xì)胞凋亡率的影響。

3、r>　　6. Western blot檢測三組細(xì)胞多藥耐藥相關(guān)蛋白1(ABCB1/p-gp)和Twist1的表達(dá)。
　　【結(jié)果】：三種細(xì)胞中，Prrx1相對表達(dá)量最低的是MCF-7細(xì)胞(p＜0.001)。用Prrx1過表達(dá)慢病毒感染MCF-7細(xì)胞后，細(xì)胞形態(tài)由“鋪路石樣”變成長梭形，并且熒光效率高達(dá)80%以上。Real-time PCR結(jié)果顯示Prrx1mRNA相對表達(dá)量是轉(zhuǎn)染前252.09倍(t=44.30, P＜0.001)，

4、波形蛋白是轉(zhuǎn)染前2.65倍(t=12.05, P＜0.001)，E-鈣黏蛋白是轉(zhuǎn)染前0.64倍(t=4.91, P＜0.001)。Transwell結(jié)果顯示Prrx1過表達(dá)的MCF-7細(xì)胞發(fā)生遷移的細(xì)胞數(shù)(71.69±6.66)明顯高于陰性對照組(40.87±4.16)(t=15.05, P＜0.001)和空白對照組(41.2±4.62)(15.76, P＜0.001)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而兩對照組之間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.21

5、, p=0.84)。CCK-8結(jié)果顯示Docetaxel作用MCF-7細(xì)胞24h和48h后的 IC50值分別是(10.94±0.64)、(10.66±1.68)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.27, p=0.80)。慢病毒感染后，Prrx1過表達(dá)的 MCF-7細(xì)胞的 IC50明顯高于空白對照組(13.30, P＜0.001)和陰性對照組(t=0.91, P＜0.001)，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而兩對照組之間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.22,

6、 p=0.83)。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示Docetaxel處理三組細(xì)胞24h后 Prrx1過表達(dá)的 MCF-7細(xì)胞的凋亡率明顯低于陰性對照組(t=9.32, P＜0.001)和空白對照組(t=9.70, P＜0.001)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而兩對照組之間比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.48, p=0.65)。Western blot結(jié)果顯示：Prrx1過表達(dá)MCF-7細(xì)胞的Twist1和多藥耐藥相關(guān)蛋白1(MDR1,ABCB1,P-gp)相對