小檗堿對TGF-β1誘導A549細胞上皮間質轉化和MRC-5細胞轉分化及細胞信號通路相關蛋白的影響.pdf

1、目的：探討小檗堿(BBR)在轉化生長因子(TGF-β1)誘導的人肺癌上皮細胞A549上皮間質轉化(EMT)過程中和人胚肺成纖維細胞MRC-5轉分化過程中，對細胞外羥脯氨酸和細胞內表征蛋白鈣粘蛋白(E-cadherin)、纖連蛋白(FN)和平滑肌肌動蛋白（α-SMA）及MAPK信號通路相關蛋白磷酸化水平、Akt信號通路相關蛋白磷酸化水平和鋅指轉錄因子Snail表達的影響。
　　方法：體外培養(yǎng)A549細胞和MRC-5細胞，采用MTT法

2、檢測不同濃度BBR對細胞增殖的抑制作用，確定適合的實驗用藥濃度;Western blot法檢測不同濃度TGF-β1誘導A549細胞EMT和MRC-5細胞轉分化表征蛋白E-cadherin、FN、α-SMA表達水平，確定適宜的TGF-β1誘導濃度。不同濃度BBR預處理的A549細胞和MRC-5細胞，TGF-β1刺激后，采用比色法測定細胞外羥脯氨酸水平，對于細胞內E-cadherin、FN、α-SMA表達水平以及MAPK信號通路相關蛋白p3

3、8、ERK1/2、JNK和Akt的磷酸化水平，以及Snail的表達水平，均采用Western blot法進行檢測。同時采用半定量PCR和Real-time PCR法，檢測了BBR對TGF-β1誘導的相應細胞表征蛋白mRNA轉錄水平的影響。
　　結果：參考MTT法檢測結果，選定BBR適宜濃度（20、40、80μmol/L）進行研究。Western blot結果顯示2ng/mL濃度TGF-β1可明顯誘導A549細胞EMT，誘導MRC-

4、5細胞轉分化。BBR預處理的A549細胞，較單純TGF-β1誘導細胞，培養(yǎng)液中羥脯氨酸水平明顯降低。Western blot法檢測結果顯示，高濃度BBR（80μmol/L）預處理細胞較單純TGF-β1誘導細胞，在一定程度抑制了FN的高表達水平，但不能逆轉E-cadherin的表達降低。BBR三個濃度(20、40、80μmol/L)預處理細胞較單純TGF-β1誘導細胞，對MAPK信號通路相關蛋白ERK1/2(Thr202/Tyr204)的

5、磷酸化水平均存在一定抑制作用，BBR(20μmol/L)對Snail存在一定抑制作用，但對p38、JNK磷酸化水平變化沒有明顯影響;另外，高濃度BBR(80μM)對p-Akt(Ser473)存在較明顯的促進作用，使其表達量恢復至接近正常水平。BBR預處理的MRC-5細胞，較單純TGF-β1誘導細胞，培養(yǎng)液中羥脯氨酸水平明顯降低。Western blot法檢測結果顯示，BBR預處理細胞較單純TGF-β1誘導細胞，α-SMA、FN表達水平受

6、抑較明顯，MAPK信號通路相關蛋白p38、ERK1/2、JNK磷酸化水平亦受到不同程度抑制，Akt磷酸化水平和Snail表達水平也明顯受到抑制。
　　結論：BBR預處理對TGF-β1誘導的A549細胞的EMT過程有一定抑制作用，但不是很顯著，其抑制機制可能與上調Akt的磷酸化水平和抑制ERK1/2的磷酸化水平有關;BBR預處理對TGF-β1誘導的MRC-5轉分化過程有較明顯抑制作用，其機制可能與BBR下調MAPK信號通路相關蛋白的