乙腦減毒疫苗與兒童重癥肌無(wú)力發(fā)病相關(guān)分子病理機(jī)制研究.pdf

1、目的：既往研究報(bào)道疫苗免疫可能是誘發(fā)自身免疫病的原因，本研究旨在探索疫苗接種是否是中國(guó)兒童重癥肌無(wú)力多發(fā)的原因,并通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)探索其分子機(jī)制。
　　方法：對(duì)BALB/c小鼠4次免疫乙型腦炎減毒活疫苗,乙型腦炎滅活疫苗,乙型肝炎疫苗,百日咳、白喉、破傷風(fēng)三聯(lián)疫苗，麻疹、流行性腮腺炎、風(fēng)疹三聯(lián)疫苗、卡介苗和PBS緩沖液，然后用衣架懸掛實(shí)驗(yàn)和測(cè)力計(jì)觀察實(shí)驗(yàn)小鼠疫苗接種后肌力，ELISA檢測(cè)血清乙酰膽堿受體抗體，對(duì)小鼠坐骨神行肌電圖重復(fù)電

2、刺激，以及免疫熒光觀察小鼠肌肉神經(jīng)肌肉接頭IgG和C3的沉積。然后用乙型腦炎減毒活疫苗全段蛋白序列與乙酰膽堿受體α亞基進(jìn)行BLAST蛋白序列對(duì)比，尋找與乙酰膽堿受體存在相似蛋白序列的疫苗蛋白。重組表達(dá)乙型腦炎減毒活疫苗RdRp蛋白，用重組表達(dá)RdRp蛋白免疫BALB/c小鼠，然后用衣架懸掛實(shí)驗(yàn)和測(cè)力計(jì)觀察實(shí)驗(yàn)小鼠疫苗接種后肌力，ELISA檢測(cè)血清乙酰膽堿受體抗體，斑點(diǎn)印跡實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證交叉免疫反應(yīng)，T細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)觀察AChR能否誘導(dǎo)重組蛋白免

3、疫老鼠脾臟T細(xì)胞增殖，并進(jìn)行肌電圖RNS檢測(cè)以及免疫熒光法觀察小鼠肌肉神經(jīng)肌肉接頭IgG和C3的沉積。
　　結(jié)果：乙型腦炎減毒活疫苗免疫小鼠可以誘導(dǎo)小鼠血清產(chǎn)生抗乙酰膽堿受體抗體，并出現(xiàn)小鼠上肢拉力減弱，小鼠衣架懸掛時(shí)間變短，部分小鼠肌電圖RNS陽(yáng)性，及小鼠神經(jīng)肌肉接頭IgG和C3的沉積。BLAST序列對(duì)比乙腦減毒疫苗RdRp蛋與AChR之間存在一個(gè)包含7個(gè)氨基酸的序列相識(shí)度達(dá)到86％。重組表達(dá) RdRp蛋白免疫小鼠導(dǎo)致血清產(chǎn)生抗

4、乙酰膽堿受體抗體，斑點(diǎn)印跡實(shí)驗(yàn)也證明RdRp免疫血清能與AChR蛋白反應(yīng)，同時(shí)AChR刺激能誘導(dǎo)RdRp蛋白免疫老鼠脾臟T細(xì)胞增殖在細(xì)胞水平證明了交叉免疫反應(yīng)的存在。另外，RdRp蛋白免疫小鼠也會(huì)出現(xiàn)上肢拉力減弱，小鼠衣架懸掛時(shí)間變短，部分RdRp免疫小鼠肌電圖RNS在5Hz和20Hz都出現(xiàn)波峰下降，并能在小鼠神經(jīng)肌肉接頭發(fā)現(xiàn)IgG和C3的沉積
　　結(jié)論：乙型腦炎減毒活疫苗可以通過(guò)其與乙酰膽堿受體α亞基存在相似片段的RDRP蛋白誘