腫瘤微環(huán)境對(duì)腫瘤預(yù)后及化療耐藥性的影響研究.pdf

1、本文主要從以下幾個(gè)部分展開(kāi)論述：
　　第一部分 食管鱗癌間質(zhì)Caveolin-1蛋白表達(dá)的預(yù)后價(jià)值研究
　　目的：
　　在全球范圍內(nèi)，食管癌的病死率高居第六位，是人類最常見(jiàn)的惡性實(shí)體腫瘤之一。盡管采用了包括手術(shù)、放療和化療在內(nèi)的綜合治療，食管癌病人的五年生存率僅有20％左右。食管癌分為兩大主要病理類型，分別是食管腺癌和食管鱗癌。我國(guó)屬于食管癌高風(fēng)險(xiǎn)區(qū)域，且90％以上食管癌患者的病理類型為食管鱗癌。因此，對(duì)食管鱗癌發(fā)病和

2、預(yù)后的相關(guān)研究意義重大。
　　惡性實(shí)體腫瘤有以下兩個(gè)主要構(gòu)成部分:腫瘤實(shí)質(zhì)和腫瘤間質(zhì)。腫瘤間質(zhì)（即腫瘤微環(huán)境）主要包括癌相關(guān)成纖維細(xì)胞(Cancer Associated Fibroblasts，CAFs)，細(xì)胞外基質(zhì)(Extracellular Matrix，ECM)，腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞等。其中，腫瘤間質(zhì)細(xì)胞，如CAFs等，能夠與腫瘤實(shí)質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生相互作用而促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移，因而在近年來(lái)受到越來(lái)越多的關(guān)注。而Caveoli

3、n-1（小凹蛋白-1，Cav-1）蛋白被多項(xiàng)研究證明是介導(dǎo)腫瘤間質(zhì)細(xì)胞和腫瘤實(shí)質(zhì)細(xì)胞相互作用的關(guān)鍵因素之一。
　　Cav-1是組成Caveolae的一種跨膜整合蛋白，可與包括酪氨酸激酶受體，G蛋白偶聯(lián)受體等在內(nèi)的信號(hào)分子結(jié)合并調(diào)節(jié)其活性，從而參與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的調(diào)節(jié)。多項(xiàng)研究表明，Cav-1在腫瘤生長(zhǎng)、侵襲和轉(zhuǎn)移等方面是不可或缺的調(diào)節(jié)因子之一。而近期報(bào)道進(jìn)一步表明，在腫瘤間質(zhì)細(xì)胞與實(shí)質(zhì)細(xì)胞的相互作用中，Cav-1具有重要的調(diào)節(jié)功能;且間

4、質(zhì)Cav-1蛋白表達(dá)缺失在多種腫瘤中與臨床預(yù)后有明顯的相關(guān)性。然而，食管鱗癌中Cav-1表達(dá)水平迄今為止極少有人研究，且其臨床、病理意義也并不明確。
　　所以，我們的研究目的是經(jīng)免疫組化染色方法評(píng)估食管鱗癌實(shí)質(zhì)和間質(zhì)中的Cav-1蛋白表達(dá)水平，并分析其與患者臨床病理因子及預(yù)后的關(guān)系。
　　方法：
　　1.研究對(duì)象及隨訪
　　研究的對(duì)象選取從2006年12月至2007年12月至我院胸外科行根治性切除術(shù)，并且術(shù)后證實(shí)

5、為食管鱗癌的病人。排除其中術(shù)前曾行放療/化療，或術(shù)后30天內(nèi)死亡的患者，最終入組患者110例，包括89例男性患者，21例女性患者。通過(guò)醫(yī)院電子病案系統(tǒng)獲取所有入組病人的臨床資料，進(jìn)行回顧性分析，并根據(jù)American Joint Committee on Cancer Staging Manual(7th ed,2010)明確其TNM分期。
　　隨訪工作自手術(shù)結(jié)束當(dāng)天開(kāi)始，持續(xù)至2013年1月或者病人死亡為止。中位隨訪時(shí)間49.2

6、個(gè)月（范圍，3.5-72.9個(gè)月）。每位病人手術(shù)結(jié)束后兩年之內(nèi)每隔三個(gè)月進(jìn)行一次常規(guī)體格檢查和病史回顧，2年后檢查周期改為每隔6個(gè)月一次。癌相關(guān)血液指標(biāo)復(fù)查視情況而定，每三或五個(gè)月一次;如有必要時(shí)可行影像學(xué)檢查。
　　所有參與實(shí)驗(yàn)的病人均已獲知實(shí)驗(yàn)內(nèi)容，并且簽署了知情同意書;本實(shí)驗(yàn)的所有步驟均經(jīng)過(guò)仔細(xì)審查，并且獲得了山東大學(xué)齊魯醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。
　　2.病理標(biāo)本處理及免疫組化染色
　　所有入組病人腫瘤標(biāo)本由本院病理

7、科獲取，固定、石蠟包埋后制作厚度5μm左右的病理切片。所有病人的切片用Cav-1抗體作免疫組織化學(xué)染色并在染色過(guò)程中設(shè)置相應(yīng)的陽(yáng)性和陰性對(duì)照。
　　3.染色結(jié)果分析
　　首先在顯微鏡低倍鏡（放大倍數(shù)100倍）下經(jīng)過(guò)初步評(píng)估篩查出10個(gè)著色較明顯的視野，然后在高倍鏡（10*40）下，分別對(duì)Caveolin-1蛋白表達(dá)陽(yáng)性的腫瘤細(xì)胞(tumor cells，T)和腫瘤間質(zhì)細(xì)胞(stromal cells，S)進(jìn)行計(jì)數(shù)。然后根據(jù)計(jì)

8、數(shù)行Caveolin-1蛋白表達(dá)級(jí)別判定并加以統(tǒng)計(jì)。統(tǒng)計(jì)結(jié)果由兩位互相獨(dú)立的病理學(xué)人員分別加以分析。
　　結(jié)果：
　　Cav-1在腫瘤實(shí)質(zhì)和間質(zhì)細(xì)胞的胞漿及胞膜上均有一定量的表達(dá)。腫瘤實(shí)質(zhì)Cav-過(guò)表達(dá)率37.3％，與腫瘤浸潤(rùn)深度相關(guān)(p=0.038)。腫瘤間質(zhì)Cav-1低表達(dá)率40.9％。間質(zhì)Cav-1低表達(dá)組的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及局部復(fù)發(fā)發(fā)生率均明顯高于間質(zhì)Cav-1高表達(dá)組(p值分別為0.020和0.002)。除此以外，腫瘤間

9、質(zhì)Cav-1低表達(dá)組病人的無(wú)病生存率(DFS，p＜0.001)和總生存率(OS，p＜0.001)均明顯低于間質(zhì)Cav-1高表達(dá)組。多因素分析表明，腫瘤間質(zhì)Cav-1表達(dá)下調(diào)是食管鱗癌病人無(wú)病生存率(DFS)和總生存率(OS)的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子(p值分別為0.028和0.007)。
　　結(jié)論：
　　對(duì)食管鱗癌而言，間質(zhì)Cav-1表達(dá)下調(diào)者其惡性程度更高。間質(zhì)Cav-1表達(dá)下調(diào)預(yù)示著淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及局部復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)更高，病人不良預(yù)后可能性更

10、大。
　　第二部分 食管鱗癌M2/M1比例的預(yù)后價(jià)值研究
　　目的：
　　近期多個(gè)報(bào)道提示，在多種惡性實(shí)體腫瘤的微環(huán)境中，M2樣巨噬細(xì)胞數(shù)目與M1樣巨噬細(xì)胞數(shù)目的比例與病人的預(yù)后有明顯的相關(guān)性。但在食管鱗癌中，以上兩種細(xì)胞對(duì)于病人生存情況的影響尚沒(méi)有人探索。我們實(shí)驗(yàn)通過(guò)長(zhǎng)期隨訪食管鱗癌病人并標(biāo)記不同極性的巨噬細(xì)胞，來(lái)評(píng)估M2/M1比的臨床病理意義，以達(dá)到檢測(cè)這一比例對(duì)病人預(yù)后預(yù)測(cè)價(jià)值的目的。
　　方法：
　

11、　收集110例食管鱗癌病人的病理切片作免疫組化，以CD40作為M1樣巨噬細(xì)胞的標(biāo)記物，以CD163作為M2樣巨噬細(xì)胞的標(biāo)記物。在顯微鏡下分別計(jì)數(shù)M1樣巨噬細(xì)胞數(shù)目和M2樣巨噬細(xì)胞的數(shù)目，然后計(jì)算出每個(gè)病例的M2/M1比例。通過(guò)隨訪獲得所有病人對(duì)應(yīng)的預(yù)后情況，最后分析M2/M1比與病人臨床病理因子之間的關(guān)系和對(duì)預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值。
　　結(jié)果：
　　在M1樣巨噬細(xì)胞計(jì)數(shù)和M2樣巨噬細(xì)胞計(jì)數(shù)與食管鱗癌預(yù)后之間不存在顯著的相關(guān)性。高M(jìn)2

12、/M1比的病人發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移的風(fēng)險(xiǎn)和局部復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)顯著升高。高M(jìn)2/M1比組患者和低M2/M1比組患者的中位生存期(MST)分別為25.4個(gè)月（范圍3.5各個(gè)月-102.3個(gè)月）和62.8個(gè)月（范圍7.5個(gè)月-103.9個(gè)月）。Kaplan-Meier分析表明高M(jìn)2/M1比與更低的5年總生存率(p＜0.001)和更低的5年無(wú)病生存率(p＜0.001)。最后，此實(shí)驗(yàn)的多因子分析結(jié)果顯示，M2/M1比是5年總生存率(p=0.016)和5年無(wú)病生