2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  研究CGI-58對5-FU誘導(dǎo)的腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞凋亡的影響及其作用機(jī)制。
  方法:
  一、離體實(shí)驗(yàn)考察CGI-58抵抗5-FU對巨噬細(xì)胞的殺傷作用及機(jī)制
  1.CGI-58缺失對5-FU誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞增殖能力的影響
  為了研究CGI-58抵抗5-FU對巨噬細(xì)胞的殺傷作用,我們在體外用CCK-8法檢測了5-FU處理PLKO與CGI-58-KD的細(xì)胞增殖活力。
  2.CGI-58缺失

2、對5-FU誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞周期的影響
  為了研究CGI-58抵抗5-FU對巨噬細(xì)胞的殺傷作用機(jī)制,我們首先在體外通過流式細(xì)胞術(shù)檢測了5-FU處理的PLKO與CGI-58-KD的細(xì)胞周期,觀察不同處理?xiàng)l件下G1期的細(xì)胞比例。
  3.CGI-58缺失對5-FU誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞凋亡的影響
  為了研究CGI-58缺失5-FU誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞凋亡的影響,我們在體外通過流式細(xì)胞術(shù)檢測了5-FU處理的PLKO與CGI-58-KD的細(xì)

3、胞凋亡,并用Western Blot檢測了其凋亡蛋白(Cleaved Caspase-3)的表達(dá)水平。
  4.CGI-58缺失對巨噬細(xì)胞線粒體功能的影響
  為了進(jìn)一步研究CGI-58抵抗5-FU對巨噬細(xì)胞的殺傷作用機(jī)制,我們又在體外對PLKO與CGI-58-KD的線粒體功能進(jìn)行了檢測,通過Seahorse檢測了其基礎(chǔ)耗氧率OCR,生物發(fā)光法檢測了其ATP生成量,熒光法檢測了其活性氧ROS的生成情況。
  5.清除R

4、OS后CGI-58缺失對巨噬細(xì)胞線粒體功能及5-FU誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞增殖和凋亡的影響
  為了驗(yàn)證上述效應(yīng)機(jī)制我們用活性氧抑制劑NAC做了回復(fù)實(shí)驗(yàn),NAC阻斷處理后在體外通過熒光法檢測了PLKO與CGI-58-KD的ROS的生成情況,CCK-8法檢測了5-FU處理的PLKO與CGI-58-KD的細(xì)胞增殖能力及Western Blot檢測了其凋亡蛋白(Cleaved Caspase-3)的表達(dá)水平。
  二、在體實(shí)驗(yàn)考察腫瘤相關(guān)

5、巨噬細(xì)胞CGI-58對5-FU化療效果的抵抗作用
  1.CGI-58轉(zhuǎn)基因小鼠的構(gòu)建(TGCGI-58)
  我們用Western Blot鑒定了CGI-58過表達(dá)的轉(zhuǎn)基因小鼠(TGCGI-58)和野生型小鼠(WT)腹腔原代巨噬細(xì)胞及其他組織器官的CGI-58的表達(dá)水平。
  2.移植瘤(黑色素瘤)型中,去除巨噬細(xì)胞后5-FU對轉(zhuǎn)基因小鼠(TGCGI-58)和野生型小鼠(WT)腫瘤預(yù)后的影響
  在體內(nèi)給轉(zhuǎn)基因

6、小鼠(TGCGI-58)和野生型小鼠(WT)皮下接種黑色素瘤后給予5-FU和巨噬細(xì)胞去除劑(氯膦酸二鈉脂質(zhì)體)處理,動態(tài)檢測小鼠的體重和生存期。
  3.移植瘤(黑色素瘤)模型中,5-FU對轉(zhuǎn)基因小鼠(TGCGI-58)和野生型小鼠(WT)腫瘤生長和預(yù)后的影響
  在體內(nèi)給轉(zhuǎn)基因小鼠(TGCGI-58)和野生型小鼠(WT)皮下接種黑色素瘤后給予5-FU化療,動態(tài)檢測小鼠的體重、腫瘤生長情況及生存期。
  4.移植瘤(黑

7、色素瘤)模型中,清除ROS后5-FU對轉(zhuǎn)基因小鼠(TGCGI-58)和野生型小鼠(WT)的腫瘤生長和預(yù)后的影響
  用活性氧抑制劑NAC阻斷處理后在體內(nèi)通過皮下移植瘤(黑色素瘤)實(shí)驗(yàn)動態(tài)檢測5-FU化療后轉(zhuǎn)基因(TGCGI-58)小鼠和野生型(WT)小鼠的體重、腫瘤生長情況及生存期。
  結(jié)果:
 ?。ㄒ唬╇x體實(shí)驗(yàn)考察CGI-58抵抗5-FU對巨噬細(xì)胞的殺傷作用及機(jī)制
  1.CGI-58缺失對5-FU誘導(dǎo)的巨噬

8、細(xì)胞增殖能力的影響
  5-FU處理后,CGI-58-KD比PLKO細(xì)胞的增殖能力明顯降低,說明CGI-58缺失會促進(jìn)5-FU對巨噬細(xì)胞增殖活力的抑制作用。
  2.CGI-58缺失對5-FU誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞周期的影響
  5-FU處理后CGI-58-KD與PLKO細(xì)胞的G1期細(xì)胞比例無明顯差異,說明CGI-58缺失對5-FU誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞周期阻滯無顯著影響。
  3.CGI-58缺失對5-FU誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞凋亡的

9、影響
  5-FU處理后,CGI-58-KD比PLKO的凋亡細(xì)胞的比例明顯增加,且凋亡蛋白Caspase-3的表達(dá)水平明顯升高,說明CGI-58缺失會促進(jìn)5-FU誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞凋亡。
  4.CGI-58缺失對巨噬細(xì)胞線粒體功能的影響
  與PLKO相比,CGI-58-KD細(xì)胞的OCR降低、ATP減少、ROS增多,揭示CGI-58缺失會損傷巨噬細(xì)胞的線粒體功能,導(dǎo)致ROS聚集。
  5.清除ROS后CGI-58缺

10、失對巨噬細(xì)胞線粒體功能及5-FU誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞增殖和凋亡的影響
  ROS抑制劑NAC阻斷后,CGI-58-KD與PLKO細(xì)胞的ROS生成基本一致,5-FU處理的CGI-58-KD與PLKO細(xì)胞的增殖能力無明顯差異,且凋亡蛋白Caspase-3的表達(dá)水平也無差異,說明清除活性氧(ROS)可消除CGI-58缺失對巨噬細(xì)胞線粒體功能的損傷和CGI-58缺失促進(jìn)5-FU對巨噬細(xì)胞增殖活力的抑制作用以及CGI-58缺失對5-FU誘導(dǎo)的巨噬

11、細(xì)胞凋亡增加,綜上提示我們清除ROS后CGI-58缺失促進(jìn)5-FU對巨噬細(xì)胞殺傷活性的效應(yīng)消失
 ?。ǘ┰隗w實(shí)驗(yàn)考察腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞CGI-58對5-FU化療效果的抵抗作用
  1.CGI-58轉(zhuǎn)基因小鼠的構(gòu)建(TGCGI-58)
  只在腹腔原代巨噬細(xì)胞中轉(zhuǎn)基因小鼠(TGCGI-58)的CGI-58的表達(dá)水平明顯高于野生型小鼠(WT),說明轉(zhuǎn)基因小鼠(TGCGI-58)構(gòu)建成功。
  2.移植瘤(黑色素瘤)型

12、中,去除巨噬細(xì)胞后5-FU對轉(zhuǎn)基因小鼠(TGCGI-58)和野生型小鼠(WT)腫瘤預(yù)后的影響
  將巨噬細(xì)胞去除后5-FU處理的轉(zhuǎn)基因小鼠(TGCGI-58)與野生型小鼠(WT)的體重和生存期均無明顯差異,說明轉(zhuǎn)基因小鼠(TGCGI-58)較之野生型小鼠(WT),5-FU化療預(yù)后差,但是巨噬細(xì)胞去除后,可消除這種差異,且預(yù)后變好,提示TAM抵抗5-FU對腫瘤的化療效果,使預(yù)后變差。
  3.移植瘤(黑色素瘤)模型中,5-FU

13、對轉(zhuǎn)基因小鼠(TGCGI-58)和野生型小鼠(WT)腫瘤生長和預(yù)后的影響
  5-FU處理后轉(zhuǎn)基因(TGCGI-58)小鼠比野生型(WT)小鼠的體重輕、腫瘤生長快,生存期變短,說明巨噬細(xì)胞CGI-58過表達(dá)會抵抗5-FU對腫瘤的殺傷作用,預(yù)后變差。
  4.移植瘤(黑色素瘤)模型中,清除ROS后5-FU對轉(zhuǎn)基因小鼠(TGCGI-58)和野生型小鼠(WT)的腫瘤生長和預(yù)后的影響
  ROS抑制劑NAC阻斷后,5-FU處理

14、的轉(zhuǎn)基因小鼠(TGCGI-58)與野生型小鼠(WT)的體重、腫瘤生長情況和生存期也無明顯差異,并且均比轉(zhuǎn)基因小鼠(TGCGI-58)+5-FU組的預(yù)后更差,這說明轉(zhuǎn)基因(TGCGI-58)小鼠較之野生型(WT)小鼠,5-FU化療預(yù)后差,而清除活性氧(ROS),不但可以消除上述這種差異而且巨噬細(xì)胞CGI-58過表達(dá)抵抗5-FU殺傷腫瘤的效應(yīng)也增強(qiáng)。
  結(jié)論:
  1.CGI-58缺失促進(jìn)5-FU對巨噬細(xì)胞的殺傷作用,而CGI

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