重組Hil-24聯(lián)合5-FU對(duì)乳腺癌細(xì)胞抑制及誘導(dǎo)凋亡研究.pdf

1、目的：以重組人白細(xì)胞介素-24(recombinant human interleukin-24，rhIL-24)聯(lián)合5-氟脲嘧啶(5-Fluorouracil，5-FU)作用于乳腺癌MDA-MB-157細(xì)胞，研究白細(xì)胞介素-24(interleukin，IL-24)單一用藥和聯(lián)合5-FU用藥對(duì)乳腺癌細(xì)胞的抑制效應(yīng)，檢測腫瘤細(xì)胞凋亡，探討聯(lián)合用藥抗腫瘤機(jī)制，為rhlL-24聯(lián)合5-FU的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)和臨床應(yīng)用提供理論指導(dǎo)。
　　 方

2、法：(1)將100μl濃度為104個(gè)細(xì)胞/ml的MDA-MB-157細(xì)胞和濃度為2×104個(gè)細(xì)胞/ml的WI-38細(xì)胞分別加入96孔板，前者在37℃、無CO2，飽和濕度；后者在37℃、5％CO2，飽和濕度條件下，培養(yǎng)24小時(shí)，棄上清，分別加入rhIL-24濃度分別為80ng/ml；100ng/ml；120ng/ml；150ng/ml；200ng/ml，5-Fu濃度分別為：5μg/ml；10μg/ml；25μg/ml；50μg/ml；75

3、μg/ml，在同樣條件下繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)，48小時(shí)，72小時(shí)；以CCK-8法檢測細(xì)胞增殖，繪制生長曲線，計(jì)算生長抑制率。(2)將100μl濃度為104個(gè)細(xì)胞/ml的MDA-MB-157細(xì)胞和濃度為2×104個(gè)細(xì)胞/ml的WI-38細(xì)胞分別加入96孔板，前者在37℃、無CO2，飽和濕度條件下，后者在37℃、5％CO2、飽和濕度條件下，培養(yǎng)24小時(shí)，棄上清，加入120ng/ml的rhIL-24聯(lián)合10μg/ml的5-Fu，分別在24小時(shí)，4

4、8小時(shí)，72小時(shí)，以CCK-8法檢測細(xì)胞增殖，繪制生長曲線，計(jì)算生長抑制率。(3)將100μl濃度為104個(gè)細(xì)胞/ml的MDA-MB-157細(xì)胞和濃度為2x104個(gè)細(xì)胞/ml的WI-38細(xì)胞分別加入6孔板，前者在37℃、無CO2、飽和濕度條件下，后者在37℃，5％CO2、飽和濕度條件下，培養(yǎng)24小時(shí)，棄上清，分別加入120ng/ml的rhIL-24，10μg/ml的5-Fu及120ng/ml的rhIL-24聯(lián)合10μg/ml的5-FU各

5、三個(gè)實(shí)驗(yàn)組，培養(yǎng)24小時(shí)，收集細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡。(4)將收集的細(xì)胞同時(shí)AnnexinV-FITC染色，在熒光顯微鏡下觀察MDA-MB-157細(xì)胞和WI-38細(xì)胞的凋亡形態(tài)學(xué)變化。
　　 結(jié)果：
　　 (1)藥物抑制濃度：rhIL-24對(duì)MDA-MB-157細(xì)胞的最適抑制濃度是120ng/ml，5-Fu對(duì)MDA-MB-157細(xì)胞的最適濃度是10μg/ml；rhIL-24對(duì)WI-38細(xì)胞無抑制作用，5-Fu對(duì)WI

6、-38細(xì)胞的最適濃度是10μg/ml。
　　 (2)聯(lián)合抑制作用：聯(lián)合組作用MDA-MB-157細(xì)胞在24小時(shí)，48小時(shí)，72小時(shí)的抑制率分別是：28.2％，36.5％，44.7％。聯(lián)合組作用WI-38細(xì)胞在24小時(shí)，48小時(shí)，72小時(shí)的抑制率分別是：5.4％，25％，68.7％。
　　 (3)細(xì)胞凋亡率：MDA-MB-157細(xì)胞，rhIL-24組細(xì)胞凋亡率14.9％，5-Fu組細(xì)胞凋亡率20.2％，聯(lián)合組細(xì)胞凋亡率26

7、.1％；WI-38細(xì)胞：rhIL-24組細(xì)胞凋亡率6.8％，5-Fu組細(xì)胞凋亡率28.1％，聯(lián)合組細(xì)胞凋亡率24.1％。
　　 (4)細(xì)胞凋亡形態(tài)觀察：rhIL-24或(和)5-FU作用MDA-MB-157細(xì)胞24小時(shí)，聯(lián)合組可見胞體固縮和凋亡小體細(xì)胞。
　　 結(jié)論：
　　 (1)rhIL-24對(duì)MDA-MB-157細(xì)胞具有抑制作用，其最適抑制濃度為120ng/ml，rhIL-24對(duì)WI-38細(xì)胞無明顯抑制作用。