MicroRNA-184在致心律失常性心肌病中的病理作用機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　研究Micro-RNA(miRNA)在致心律失常性心肌病(AC)發(fā)病機(jī)制中的作用
　　方法與結(jié)果:
　　對(duì)HL-1及Pkp2敲低HL-1心肌細(xì)胞(HL-1Pkp2-shRNA)進(jìn)行了含有750個(gè)miRNA的芯片篩查，發(fā)現(xiàn)了59個(gè)顯著性差異表達(dá)的miRNA。其中miRNA-184(miR-184)是在HL-1 Pkp2-shRNA中較對(duì)照組細(xì)胞表達(dá)下降最顯著的一個(gè)miRNA。同時(shí)，miR-184在AC小鼠模型

2、的心臟組織及心肌細(xì)胞中均較正常小鼠顯著降低。miR-184在非成熟心肌細(xì)胞及心臟CD44+間充質(zhì)祖細(xì)胞中表達(dá)最高，并且其表達(dá)量隨心臟的發(fā)育逐漸降低。染色質(zhì)免疫共沉淀(ChIP)實(shí)驗(yàn)表明，在AC模型中被抑制的E2F信號(hào)通路通過E2F1與miR-1845'基因區(qū)域結(jié)合而調(diào)控miR-184的表達(dá)。通過對(duì)E2F1激動(dòng)劑CCND1的過表達(dá)或?qū)2F1抑制劑RB1的抑制，均能增加miR-184的表達(dá)。另一方面，ChIP實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶1（

3、DNMT1）在HL-1 Pkp2-shRNA心肌細(xì)胞中與miR-184啟動(dòng)子區(qū)域大量結(jié)合，導(dǎo)致CpG位點(diǎn)過度甲基化，從而使miR-184表達(dá)受到沉默。去甲基化藥物5-Aza-2'-Deoxycytidine（5-Aza-D）的使用以及轉(zhuǎn)染針對(duì)Dnmt1的shRNA以抑制Dnmt1的表達(dá)均能增加miR-184的表達(dá)。在將miR-184的預(yù)測(cè)靶基因與HL-1和HL-1Pkp2-shRNA心肌細(xì)胞中差異表達(dá)的基因進(jìn)行的配對(duì)研究顯示，差異表達(dá)的

4、miR-184靶基因在細(xì)胞生長(zhǎng)，分化及死亡過程中起到主要作用。其中，A gpat1及Agpat3這兩個(gè)脂肪代謝中的關(guān)鍵參與基因，被證明是miR-184的直接作用靶點(diǎn)。在HL-1及心臟CD44+細(xì)胞中進(jìn)行的脂肪分化誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)中，miR-184敲低組與對(duì)照組相比均能更顯著的誘導(dǎo)心肌細(xì)胞脂肪化。反之，miR-184過表達(dá)組與對(duì)照組相比則能夠抑制心肌細(xì)胞脂肪化。
　　結(jié)論:
　　本文第一次在AC模型中進(jìn)行microRNA芯片篩查，發(fā)現(xiàn)