ZIP5(SLC39A5)表達下調抑制食管癌移植瘤生長及其機制的研究.pdf

1、目的：從動物水平探討ZIP5(SLC39A5)表達下調對食管癌發(fā)生、發(fā)展的作用及其作用機制。
　　方法：
　　1.利用RT-PCR方法驗證ZIP5mRNA在KYSE170K和KYSE170S兩種細胞株中的表達水平；
　　2.收集對數期的兩種細胞，分別接種至兩組裸鼠右肩胛部皮下（5×106細胞/只）；動態(tài)觀察裸鼠移植瘤的體積變化，比較ZIP5表達下調對食管癌移植瘤生長的影響。
　　3.利用流式細胞術方法檢測ZIP5

2、表達下調對裸鼠移植瘤組織中細胞G0/G1期百分比和凋亡率的影響。
　　4.利用qRT-PCR方法從mRNA水平檢測ZIP5表達下調對COX-2， cyclin D1和E-cadherin基因表達的影響；采用免疫組織化學和Western-blot方法從蛋白水平檢測ZIP5表達下調對COX-2，cyclin D1和E-cadherin蛋白表達的影響。
　　5.利用電感耦合等離子體質譜法檢測裸鼠外周血和移植瘤組織中的鋅水平。

3、>　　結果：1 RT-PCR結果顯示ZIP5 mRNA和蛋白在KYSE170K細胞株中的相對表達量分別降低了79.01％和77.84%，認為ZIP5在KYSE170K細胞株中低表達；2食管癌移植瘤體積變化曲線顯示，處死裸鼠時實驗組（接種KYSE170K）、對照組（接種KYSE170S）移植瘤體積分別為（614.50±87.12）mm3、（1095.43±266.64）mm3，實驗組移植瘤體積小于對照組（P=0.012）；實驗組、對照組瘤

4、體的重量分別為（0.44±0.11）g，（0.70±0.08）g，實驗組移植瘤的重量低于對照組（P=0.007）；3流式細胞術檢測移植瘤細胞G0/G1期百分比和凋亡率的結果顯示，實驗組G0/G1期百分比（48.94%±4.46%）與對照組（46.3%±2.78%）相比，兩組間無統(tǒng)計學差異（P>0.05）；實驗組細胞凋亡率（32.50%±5.24%）與對照組（37.16%±4.40%）相比，兩組間無統(tǒng)計學差異（P>0.05）；4 qRT-

5、PCR方法檢測移植瘤中ZIP5、COX-2、cyclin D1、E-cadherin、Bcl-2、VEGF和MMP9 mRNA水平顯示，ZIP5 mRNA在實驗組移植瘤中的相對表達（0.46±0.33）低于對照組（1.06±0.43），COX-2 mRNA在實驗組移植瘤中的相對表達量（0.64±0.12）低于對照組（1.03±0.25），E-cadherin mRNA在實驗組移植瘤中的相對表達量（1.68±0.31）高于對照組（1.00

6、±0.09）（P<0.05），而cyclin D1、Bcl-2、VEGF和MMP9 mRNA在在兩組移植瘤中的相對表達量均無差異。免疫組化檢測移植瘤中ZIP5、COX-2、E-cadherin蛋白的計分結果顯示，ZIP5蛋白在實驗組移植瘤組織中的得分（2.55±0.34）低于對照組（5.15±1.74），COX-2蛋白在實驗組移植瘤組織中的得分（1.43±0.69）低于對照組（3.23±1.29），而E-cadherin蛋白在實驗組移植

7、瘤組織中的得分（10.6±1.33）高于對照組（6.70±1.64）；Western-blot檢測移植瘤中ZIP5、COX-2、E-cadherin蛋白的結果顯示，ZIP5蛋白在實驗組移植瘤中的相對表達量（0.38±0.02）低于對照組（0.81±0.13），COX-2蛋白在實驗組移植瘤中的相對表達量（0.13±0.06）低于對照組（0.33±0.11），E-cadherin蛋白在實驗組移植瘤中的相對表達量（0.85±0.05）高于對照

8、組（0.45±0.04）（P<0.05）；5電感耦合等離子體質譜法測量鋅含量的結果顯示，外周血中鋅在實驗組和對照組中的含量分別為（2.47±0.27）mg/kg、（2.48±0.28）mg/kg，兩組間無統(tǒng)計學差異，移植瘤組織中鋅在實驗組和對照組的含量（20.30±3.28） mg/kg、（19.60±3.85）mg/kg，兩組間差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。
　　結論：
　　1.ZIP5表達下調能夠抑制裸鼠移植瘤的生長