人臍帶MSCs源microvesicles的分離及特異microRNAs檢測.pdf

1、背景：微粒體(Microvesicles，MVs)是多種細胞釋放在微環(huán)境中的質(zhì)膜囊泡。近年來人們關(guān)注到細胞源MVs作為細胞間一個新的分子通訊介質(zhì)，能夠轉(zhuǎn)運大量生物活性分子。
　　 目的：分離人臍帶間充質(zhì)干細胞(mesenchymal stem cells，MSCs)源MVs，檢測特異性microRNAs表達，探討MSCs潛在的細胞通訊方式。
　　 方法
　　 1.組織塊培養(yǎng)法分離培養(yǎng)人臍帶MSCs，進行傳代擴增；

2、從人臍帶MSCs條件培養(yǎng)基(conditioned medium，CM)中提取MVs。
　　 2.對第3代MSCs細胞標記CD29-PE、CD44-APC、CD34-FITC、CD45-PerCP，流式細胞儀分析鑒定。
　　 3.TRIzol法提取細胞人臍帶間充質(zhì)干細胞及MVs中總RNA，采用實時熒光定量PCR技術(shù)檢測miR-100和miR-21的表達水平，以U6作為內(nèi)參對照。
　　 結(jié)果
　　 1.細胞

3、形態(tài)呈長梭形，原代培養(yǎng)12d、傳代培養(yǎng)4d細胞融合度達90％，細胞排列成漩渦狀。
　　 2.人臍帶間充質(zhì)干細胞不表達造血細胞標志CD34(0.87%)、CD45(1.28%)，強表達β1-整合素CD29(96.68%)、基質(zhì)受體CD44(92.78%)。
　　 3.miR-100在正常培養(yǎng)MSCs、MVs、凍存MSCs中均能檢測到表達。其中miR-100在MVs和正常培養(yǎng)MSCs中表達量無明顯差異(P>0.05)，miR

4、-100在凍存MSCs中表達量顯著低于正常培養(yǎng)MSCs(P<0.05)。
　　 4.miR-21在正常培養(yǎng)MSCs、MVs、凍存MSCs中均能檢測到表達。其中miR-21在MVs中表達量較正常培養(yǎng)MSCs中明顯提高(P<0.05)，miR-21在凍存MSCs中表達量顯著低于正常培養(yǎng)MSCs(P<0.05)。
　　 結(jié)論
　　 1.從人臍帶組織中成功分離培養(yǎng)MSCs，收獲大量經(jīng)過生物學(xué)鑒定的MSCs。