Adipophilin通過PKCδ抑制nCEH促進(jìn)巨噬細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積.pdf

1、[目的]獲得adipophilin通過nCEH促使細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)積聚的可靠證據(jù)，闡明adipophilin通過nCEH促使細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)積聚的機(jī)制，為動(dòng)脈粥樣硬化的防治尋找新靶點(diǎn)。
　　[方法]將adipophilin沉默表達(dá)和穩(wěn)定高表達(dá)的逆轉(zhuǎn)錄病毒質(zhì)粒載體轉(zhuǎn)染PA317包裝細(xì)胞，收集病毒，感染RAW264.7細(xì)胞，篩選，制備高和沉默表達(dá)adipophilin的細(xì)胞。在高和沉默表達(dá)adipophilin的RAW264.7細(xì)胞中，分別用RT

2、- PCR和Western blot檢測(cè)nCEH的mRNA和蛋白表達(dá)的變化；高效液相色譜法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)膽固醇酯的含量。在高表達(dá)adipophilin的RAW264.7細(xì)胞中，用PKC5激動(dòng)劑0.1^mol/L PMA預(yù)孵育30 min后，或者用PKC5特異性抑制劑0.1^ mol/ L Rottlerin預(yù)孵育30 min后，分別用 RT- PCR和Western blot檢測(cè)nCEH的mRNA水平和蛋白表達(dá)的改變；高效液相色譜法來檢測(cè)細(xì)

3、胞內(nèi)膽固醇酯含量。
　　[結(jié)果]在高表達(dá)adipophilin的RAW264.7細(xì)胞中，膽固醇酯的含量明顯增加，在沉默表達(dá)adipophilin的RAW264.7細(xì)胞中，膽固醇酯的含量顯著減少；同時(shí)，adipophilin能夠抑制nCEH mRNA和蛋白的表達(dá)；在高表達(dá)adipophilin的RAW264.7細(xì)胞中，用PKC5激動(dòng)劑0.1^mol/ L PMA預(yù)孵育30 min后，nCEH的mRNA與蛋白表達(dá)水平明顯降低，用PKC