波生坦對(duì)左向右分流肺動(dòng)脈高壓大鼠肺血管重構(gòu)的影響.pdf

1、目的：先心病肺動(dòng)脈高壓(PAH)是由于肺血管重構(gòu)導(dǎo)致的，以肺動(dòng)脈壓力和肺血管阻力進(jìn)行性升高為特征的病理綜合征，最終導(dǎo)致右心功能衰竭甚至死亡。在肺動(dòng)脈高壓患者及肺動(dòng)脈高壓動(dòng)物模型中，血漿內(nèi)皮素-1(Endothelin-1，ET-1)水平升高，肺組織內(nèi)皮素系統(tǒng)激活。ET-1是一種主要由血管內(nèi)皮細(xì)胞釋放的強(qiáng)效縮血管活性肽和促血管平滑肌細(xì)胞分裂原，是目前已知作用最強(qiáng)效應(yīng)最持久的縮血管物質(zhì)，同時(shí)促進(jìn)多種細(xì)胞增殖參與肺血管重構(gòu)。ET-1通過(guò)與ET

2、A受體和ETB受體結(jié)合發(fā)揮生物活性。在肺動(dòng)脈高壓動(dòng)物模型中證實(shí)ET受體拮抗劑具有治療作用。波生坦(bosentan，BST)是一種口服ETA/B受體拮抗劑，研究發(fā)現(xiàn)它能夠明顯改善肺動(dòng)脈高壓患者癥狀、運(yùn)動(dòng)耐量、血流動(dòng)力學(xué)、動(dòng)態(tài)心電圖參數(shù)和肺動(dòng)脈高壓患者的預(yù)后，但國(guó)內(nèi)外關(guān)于其對(duì)肺血管重構(gòu)影響的研究甚少。本實(shí)驗(yàn)旨在建立大鼠腹主動(dòng)脈.腔靜脈分流模型，模擬先心病左向右分流肺動(dòng)脈高壓，從形態(tài)學(xué)及分子水平探討肺血管重構(gòu)機(jī)制；并給予波生坦藥物干預(yù)，觀察

3、波生坦對(duì)肺血管重構(gòu)的影響，從而為臨床治療先心病肺動(dòng)脈高壓提供依據(jù)。
　　方法：雄性SD大鼠24只，隨機(jī)分為對(duì)照組(control組)、肺動(dòng)脈高壓組(PAH組)、波生坦組(BST組)，每組8只。對(duì)照組僅做“假手術(shù)”對(duì)照，PAH組和BST組進(jìn)行腹主動(dòng)脈.下腔靜脈造瘺手術(shù)，建立左向右分流肺動(dòng)脈高壓大鼠模型。飼養(yǎng)3周后，從第4周開(kāi)始BST組每天給予波生坦(100mg/kg)灌胃干預(yù)，其余兩組給予生理鹽水灌胃，繼續(xù)飼養(yǎng)3周。6周后所有大鼠測(cè)

4、定：平均動(dòng)脈壓(MAP)、平均肺動(dòng)脈壓(mPAP)、右室收縮壓(RVSP)、右心室收縮壓上升最大速率(dp/dtmax)、右心室肥厚指數(shù)：右心室質(zhì)量/(左心室質(zhì)量+室間隔質(zhì)量)[RV/(LV+S)]、右心室質(zhì)量/體重(RV/BW)及(左心室+室間隔質(zhì)量)/體重[(LV+S)/BW]；酶聯(lián)免疫法測(cè)定血漿ET-1水平；免疫組化法觀察肺動(dòng)脈ETA和ETB受體表達(dá)；圖像分析：測(cè)量ETA和ETB受體平均光密度(AOD)、15～50μm肺小動(dòng)脈百分

5、比，同時(shí)測(cè)量50～100μm和101～150μm肺小動(dòng)脈管壁厚度占血管外徑的百分比(WT％)和管壁面積占血管總面積的百分比(WA％)；光鏡下觀察肺動(dòng)脈病理形態(tài)改變。
　　結(jié)果：
　　1血流動(dòng)力學(xué)的測(cè)定
　　與對(duì)照組比較，PAH組大鼠mPAP、RVSP和dP/dtmax均升高(P<0.05)；與PAH組比較，BST組大鼠mPAP和RVSP降低(P<0.05)。三組MAP比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　2

6、各心室的相對(duì)重量
　　與對(duì)照組相比，PAH組大鼠RV/BW和(LV+S)/BW升高(P<0.05)；BST組大鼠RV/BW和(LV+S)/BW與對(duì)照組和PAH組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。三組RV/(LV+S)和BW比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　3血漿ET-1水平
　　PAH組血漿ET-1水平顯著高于對(duì)照組(P<0.01)；而B(niǎo)ST組血漿ET-1水平與對(duì)照組(P<0.01)和PAH組(P<0.0

7、5)比較顯著升高。
　　4肺動(dòng)脈ETA及ETB受體表達(dá)
　　ETA受體陽(yáng)性物在肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞上表達(dá)，ETB受體陽(yáng)性物大部分在肺動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞上表達(dá)，少量在平滑肌細(xì)胞上表達(dá)，陽(yáng)性物顯棕黃色顆粒。PAH組ETA受體AOD高于對(duì)照組(P<0.05)，給予波生坦干預(yù)后AOD低于PAH組(P<0.05)，與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。PAH組ETB受體AOD顯著低于對(duì)照組(P<0.01)，給予波生坦干預(yù)后AOD顯著高于

8、PAH組(P<0.01)，但低于對(duì)照組(P<0.05)。
　　515～50μm肺小血管百分比
　　PAH組肌性動(dòng)脈與部分肌性動(dòng)脈百分比顯著高于對(duì)照組與BST組(P<0.01)；非肌性動(dòng)脈百分比顯著低于對(duì)照組和BST組(P<0.01)。BST組肌性動(dòng)脈、部分肌性動(dòng)脈、非肌性動(dòng)脈百分比與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　6肺動(dòng)脈WT％和WA％的測(cè)定
　　PAH組101～150μm肌性動(dòng)脈WT％顯著高于

9、BST組與對(duì)照組(P<0.01)，BST組101～150μm肌性動(dòng)脈WT％與對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；PAH組50～100μm肌性動(dòng)脈WT％顯著高于BST組與對(duì)照組(P<0.01)，BST組50～100μm肌性動(dòng)脈WT％顯著高于對(duì)照組(P<0.01)。對(duì)照組101～150μm肌性動(dòng)脈WA％顯著高于BST組與對(duì)照組(P<0.01)，BST組101～150μm肌性動(dòng)脈WA％高于對(duì)照組(P<0.05)；50～100μm肌性動(dòng)

10、脈WA％結(jié)果與101～150μm肌性動(dòng)脈WA％結(jié)果相同。
　　7肺動(dòng)脈病理形態(tài)改變
　　光鏡下肺動(dòng)脈HE染色可見(jiàn)對(duì)照組肺動(dòng)脈管壁薄，內(nèi)膜光滑，內(nèi)皮細(xì)胞扁平。RAH組大鼠肺動(dòng)脈內(nèi)膜及中膜肥厚，平滑肌細(xì)胞增殖，排列紊亂，管腔狹窄，同時(shí)伴有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，而B(niǎo)ST治療后能夠明顯改善上述肺動(dòng)脈病理形態(tài)改變。
　　結(jié)論：
　　1血漿ET-1水平升高和ETA、ETB受體表達(dá)失平衡在左向右分流肺動(dòng)脈高壓肺血管重構(gòu)中起著重要的作用