HGF-c-Met對(duì)左向右分流繼發(fā)肺動(dòng)脈高壓大鼠肺血管重構(gòu)的影響.pdf

1、研究背景和目的
　　 左向右分流型先天性心臟病使肺循環(huán)長(zhǎng)期處于高灌注狀態(tài),肺動(dòng)脈管壁承受血流沖擊的機(jī)械應(yīng)力持續(xù)過(guò)度增加,致使內(nèi)皮細(xì)胞(endothelial cell,EC)受損、平滑肌細(xì)胞(smooth muscle cell,SMC)增生、肺血管管腔狹窄,肺血管發(fā)生重構(gòu)(pulmonary vascularremodeling,PVR),形成肺動(dòng)脈高壓(pulmonary arterial hypertension,PAH)

2、。PAH程度直接影響患者的治療及預(yù)后,進(jìn)入肺動(dòng)脈高壓晚期,治療困難,預(yù)后不良。對(duì)于左向右分流型先天性心臟病PAH形成過(guò)程、機(jī)制、干預(yù)和預(yù)防的研究仍是值得研究的重要課題。
　　 近年來(lái)在缺血性心肌病方面的研究發(fā)現(xiàn)肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(hepatocyte growth factor,HGF)具有較強(qiáng)的促血管內(nèi)皮細(xì)胞增生,修復(fù)血管內(nèi)皮作用。它通過(guò)促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞分化、增生,保護(hù)血管內(nèi)皮,具有抑制內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的作用,并可抑制纖維化反應(yīng)。研究

3、表明外源性HGF可促進(jìn)兔心肌梗死后缺血部位的血管內(nèi)皮細(xì)胞增生,修復(fù)受損的血管內(nèi)膜防止血栓形成,并可促進(jìn)形成新的微血管。原癌基因編碼蛋白Met(mesenchymal-epithelial transition factor,c-Met)是至今唯一被認(rèn)識(shí)的HGF高親合力受體。目前,對(duì)損傷細(xì)胞修復(fù)和血管形成的作用和機(jī)制等方面的研究備受關(guān)注。
　　 HGF/c-Met在左向右分流肺動(dòng)脈高壓的肺組織的表達(dá)情況以及HGF/c-Met對(duì)此類

4、肺動(dòng)脈高壓的肺血管重構(gòu)有何影響仍不得而知,該問(wèn)題值得研究。本課題建立左向右分流型PAH大鼠模型,并給予外源性的HGF,通過(guò)運(yùn)用生理記錄儀和病理學(xué)方法分別觀察血流動(dòng)力學(xué)和肺血管結(jié)構(gòu)的變化,運(yùn)用免疫組織化學(xué)、Western blotting等方法分析HGF、c-Met在左向右分流型PAH大鼠肺組織的表達(dá),運(yùn)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)半胱氨酸的天門(mén)冬氨酸蛋白酶-3(cysteine-aspartic proteases-3,Caspase-3)、

5、增殖細(xì)胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)在大鼠肺組織的表達(dá),以及運(yùn)用TUNEL法檢測(cè)肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞的凋亡情況,從而研究HGF/c-Met對(duì)左向右分流型PAH大鼠肺動(dòng)脈SMC的增殖與凋亡的調(diào)節(jié)作用以及對(duì)左向右分流型PAH的PVR的影響。
　　 本課題將為探討左向右分流型PAH形成的機(jī)制及HGF/c-Met對(duì)左向右分流型PAH的PVR的影響提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)及理論指導(dǎo)。
　　

6、 方法
　　 本研究分為兩部分
　　 第一部分:HGF/c-Met在左向右分流繼發(fā)肺動(dòng)脈高壓大鼠肺血管中的表達(dá)及作用。雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠,隨機(jī)均分為對(duì)照組(Control Group),分流組(ShuntGroup)和HGF組(HGF Group),分流組及HGF組行套管法頸總動(dòng)脈-頸外靜脈分流術(shù)以建立左向右分流繼發(fā)肺動(dòng)脈高壓大鼠模型,對(duì)照組行假手術(shù),HGF組于術(shù)后第3天開(kāi)始予腹腔注射HGF蛋

7、白2mg/kg/日。分流組和HGF組分別于術(shù)后第4、8、12、16周行超聲檢查明確分流血管的通暢性,檢測(cè)肺動(dòng)脈壓力、右心室肥大指數(shù)等;常規(guī)HE染色觀察肺小動(dòng)脈重構(gòu)的病理變化,計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)測(cè)量肺動(dòng)脈管壁厚度占外徑的百分比(MT％);免疫組織化學(xué)和Western blotting檢測(cè)HGF、c-Met蛋白在肺動(dòng)脈的表達(dá)。
　　 第二部分:HGF/c-Met對(duì)左向右分流繼發(fā)肺動(dòng)脈高壓大鼠肺血管平滑肌細(xì)胞凋亡和增殖的影響及意義

8、r>　　 免疫組織化學(xué)檢測(cè)Caspase-3、PCNA蛋白在肺中等動(dòng)脈的表達(dá),Western blotting檢測(cè)Caspase-3蛋白在肺組織的表達(dá),脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶缺口末端標(biāo)記(TUNEL)法檢測(cè)肺中等動(dòng)脈SMC凋亡情況,計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)測(cè)量肺中等動(dòng)脈中層凋亡細(xì)胞數(shù)占SMC數(shù)的百分比(apoptotic index,AI),及增殖細(xì)胞數(shù)占SMC數(shù)的百分比(proliferation index,PI)。
　　 結(jié)

9、論
　　 1.套管法頸總動(dòng)脈-頸外靜脈分流術(shù)可造成大鼠類似左向右分流型先天性心臟病,可導(dǎo)致肺動(dòng)脈壓力持續(xù)升高,肺中等動(dòng)脈管壁中層增厚,右心室肥厚等,藉此成功建立左向右分流繼發(fā)肺動(dòng)脈高壓大鼠模型;
　　 2.左向右分流繼發(fā)肺動(dòng)脈高壓大鼠肺組織中HGF、c-Met蛋白的表達(dá)與肺動(dòng)脈壓力及肺中等動(dòng)脈管壁厚度百分比呈負(fù)相關(guān);外源性HGF可有效提高HGF、c-Met蛋白在模型大鼠肺組織的表達(dá),降低其肺動(dòng)脈壓力;
　　 3.