包蟲(chóng)病所致過(guò)敏性休克危險(xiǎn)因素的識(shí)別和肺組織差異基因表達(dá)的研究.pdf

1、目的：在包蟲(chóng)病的臨床實(shí)踐中，因手術(shù)、外傷、自發(fā)性囊腫破裂等導(dǎo)致的過(guò)敏性休克為該病嚴(yán)重的并發(fā)癥，其來(lái)勢(shì)兇猛，處置不當(dāng)可致嚴(yán)重后果，甚至死亡。目前對(duì)于包蟲(chóng)所致過(guò)敏性休克的研究甚少，且都是在過(guò)敏的動(dòng)物模型的基礎(chǔ)上復(fù)制，并不能夠代表臨床，使得一直以來(lái)圍術(shù)期包蟲(chóng)所致過(guò)敏性休克的研究處于停滯狀態(tài)。如果在臨床已發(fā)病例的基礎(chǔ)上能夠通過(guò)回顧性的研究調(diào)查明確圍術(shù)期發(fā)生包蟲(chóng)所致過(guò)敏性休克的危險(xiǎn)因素，對(duì)以后預(yù)行包蟲(chóng)手術(shù)的患者進(jìn)行提前合理的預(yù)防，來(lái)降低發(fā)生率、改

2、善預(yù)后，為建立包蟲(chóng)病患者致過(guò)敏性休克的防治策略提供科學(xué)依據(jù)。目前認(rèn)為過(guò)敏反應(yīng)是一種由多個(gè)基因協(xié)同作用、由遺傳因素和環(huán)境因素共同作用的免疫性遺傳病，由相當(dāng)多的微效基因共同參與加上環(huán)境因素的協(xié)同而發(fā)病。各個(gè)基因之間、多個(gè)基因與環(huán)境之間的交互作用可能對(duì)過(guò)敏性疾病的發(fā)生起著推動(dòng)作用。基因芯片技術(shù)可以從多角度對(duì)具體病例的基因特征進(jìn)行分析。通過(guò)掃描分析，得出基因表達(dá)的差異信息，從而對(duì)闡明包蟲(chóng)所致過(guò)敏性休克的分子遺傳學(xué)發(fā)病機(jī)制、早期基因診斷和藥物敏感

3、性基因的篩選提供參考。
　　方法：⑴2008年1月—2013年9月新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院共收治細(xì)粒棘球蚴病擬行手術(shù)治療的患者。過(guò)敏性休克病例16例。對(duì)照組：未發(fā)生過(guò)敏性休克病例43例。對(duì)患者的所有人口學(xué)、影像學(xué)、臨床資料、免疫學(xué)進(jìn)行匯總比較，揭示圍術(shù)期包蟲(chóng)病所致過(guò)敏性休克患者的臨床與免疫學(xué)危險(xiǎn)因素。⑵對(duì)兩例反復(fù)發(fā)生包蟲(chóng)所致過(guò)敏性休克患者的免疫學(xué)特性和圍術(shù)期管理進(jìn)行分析找出規(guī)律。⑶從屠宰場(chǎng)自然感染 Eg的綿羊肝臟中采集新鮮原頭蚴（

4、PSC），經(jīng)1％的胃蛋白酶消化后檢測(cè)蟲(chóng)體活性并計(jì)數(shù)，于37℃、5%CO2條件下體外培養(yǎng)，在培養(yǎng)的不同時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)取適量樣品于倒置顯微鏡下觀察、拍照并記錄原頭蚴生長(zhǎng)發(fā)育情況，通過(guò)透射電子顯微鏡觀察培養(yǎng)囊泡的超微結(jié)構(gòu)；分別將體外培養(yǎng)獲得的Eg微囊以每鼠50個(gè)微囊的劑量，通過(guò)腹腔注射的方法分別接種C57小鼠，建立小鼠繼發(fā)性感染模型。⑷建立棘球蚴繼發(fā)感染小鼠動(dòng)物模型，模擬臨床使用囊液對(duì)包蟲(chóng)小鼠致敏建立小鼠包蟲(chóng)過(guò)敏反應(yīng)模型，通過(guò)對(duì)小鼠肺組織進(jìn)行基因

5、表達(dá)譜芯片分析，分析其差異表達(dá)基因及通路。
　　結(jié)果：①I(mǎi)L-4水平與囊腫的大小是圍術(shù)期導(dǎo)致包蟲(chóng)病所致過(guò)敏性休克的獨(dú)立的危險(xiǎn)因素。當(dāng)術(shù)前IL-4的水平大于415.67ng/ml的閾值時(shí)有發(fā)生圍術(shù)期包蟲(chóng)所致過(guò)敏性休克的風(fēng)險(xiǎn)，靈敏度為75.0％，特異性為97.7％的。②當(dāng)B超或是CT顯示術(shù)前囊腫大小大于7.8厘米的閾值時(shí)，術(shù)中囊腫破裂的風(fēng)險(xiǎn)較大，靈敏度為81.3％的，特異性為76.7％的。③患者年齡每增加1歲，患者過(guò)敏性休克發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)

6、降為原來(lái)的0.962倍。IL-4差值每增加1，患者過(guò)敏性休克發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)升高為原來(lái)的1.014倍；IL-10差值每增加1，患者過(guò)敏性休克發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)降低為原來(lái)的0.677倍，提示若細(xì)粒棘球蚴患者擬行包蟲(chóng)手術(shù)，且術(shù)前包囊直徑超過(guò)7.8cm的患者，可采用術(shù)前降低IL-4或提高IL-10的方法來(lái)減輕或避免過(guò)敏性休克的發(fā)生。④第一次行包蟲(chóng)手術(shù)發(fā)生過(guò)敏性休克的患者，在第二次術(shù)前嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞的水平仍然高于基礎(chǔ)水平，且抗 EgCF和抗EgB

7、抗體呈現(xiàn)+++，術(shù)前IgG水平增高明顯。⑤棘球蚴病所致過(guò)敏性休克不同于Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)，除IgE水平升高外，還同時(shí)伴隨有IgG1水平的升高；同時(shí)伴隨有介質(zhì)不同程度的釋放增加，例如：組胺、PAF、TXB2。⑥通過(guò)基因表達(dá)譜的分析發(fā)現(xiàn)：在有無(wú)發(fā)生過(guò)敏反應(yīng)時(shí)差異表達(dá)的基因集中在與代謝相關(guān)的基因、參與炎癥反應(yīng)的基因、與細(xì)胞凋亡相關(guān)的基因、和與免疫應(yīng)答相關(guān)的基因上；而相關(guān)通路集中在MAPK信號(hào)通路、G蛋白偶聯(lián)受體轉(zhuǎn)導(dǎo)通路、花生四烯酸代謝通路、Wnt通

8、路、Spliceosome通路、TGF-β信號(hào)途徑都參與了過(guò)敏的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。
　　結(jié)論：⑴IL-4的水平大于415.67ng/ml，囊腫大小大于7.8厘米是圍術(shù)期發(fā)生包蟲(chóng)所致過(guò)敏性休克的獨(dú)立的危險(xiǎn)因素。⑵第一次行包蟲(chóng)手術(shù)發(fā)生過(guò)敏性休克的患者，在第二次術(shù)前嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞的水平仍然高于基礎(chǔ)水平，且抗EgCF和抗EgB抗體呈現(xiàn)+++，術(shù)前IgG水平增高明顯。仍有發(fā)生第二次過(guò)敏性休克的可能。⑶棘球蚴病所致過(guò)敏性休克除IgE水