極端溫度條件對大鼠調(diào)節(jié)性T細(xì)胞影響的研究.pdf

1、目的：探討環(huán)境溫度發(fā)生驟然變化時(shí)大鼠CD4+、CD4+CD25+、CD4+CD25+Foxp3+淋巴細(xì)胞數(shù)量的變化規(guī)律，為突然氣溫變化所長生的感染性及免疫性相關(guān)疾病的防治提供新的思路和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：①將252只9-15周齡雄性SD大鼠，體重198-378克(275.24g±35.73g)應(yīng)用人工氣候培養(yǎng)箱制作驟降溫寒冷和驟升溫極熱大鼠模型；②大鼠隨機(jī)分為正常溫度(20℃)、驟降溫(4℃)和驟降溫(-12℃)、驟升溫(3

2、7℃)等四組，每個(gè)溫度組又設(shè)立對照組、Con-A組、LPS組等三個(gè)亞組，每個(gè)亞組觀察1h、4h、8h、12h、24h、48h和168h七個(gè)時(shí)間點(diǎn)，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)3只SD大鼠；③觀察結(jié)束后給大鼠腹腔注射水合氯醛全身麻醉，頸動(dòng)脈取血，經(jīng)EDTA抗凝，離心取血漿；④PE-CD25+PE-Cy5-CD4+FITC-Foxp3抗大鼠單克隆抗體免疫細(xì)胞化學(xué)染色標(biāo)記T淋巴細(xì)胞表面CD4、CD25，以及T淋巴細(xì)胞胞漿Foxp3抗原分子；⑤流式細(xì)胞儀檢測大于

3、30000細(xì)胞，計(jì)數(shù)CD4+、CD4+CD25+、CD4+CD25+Foxp3+細(xì)胞陽性率；⑥統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：使用SPSS17統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行，實(shí)驗(yàn)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(()±SD)表示，統(tǒng)計(jì)結(jié)果使用ANOVA法進(jìn)行方差分析，LSD法進(jìn)行t-檢驗(yàn)。
　　 結(jié)果：⑴CD4+在非刺激條件下不同時(shí)間、不同溫度表達(dá)變化差異很大，其中在8h、12h、48h、168h不同溫度組之間存在顯著差異(P<0.05)，而20℃、-12℃、37℃時(shí)，不同時(shí)間組

4、之間也存在顯著差異(P<0.05)。在37℃、4℃、-12℃時(shí)，4h、48h組低于正常對照組，以前者為甚。⑵CD4+在LPS刺激條件下不同時(shí)間、不同溫度表達(dá)變化差異較大，其中在8h、168h不同溫度組之間存在顯著差異(P<0.05)，而4℃、-12℃、37℃時(shí)，不同時(shí)間組之間也存在顯著差異(P<0.05)。在-12℃時(shí)，1h、168h高于正常對照組，37℃時(shí)，4h、48h低于正常對照組。⑶CD4+在Con-A刺激條件下不同時(shí)間、不同溫度

5、表達(dá)變化差異較大，其中在24h不同溫度組之間存在顯著差異(P<0.05)，而20℃、-12℃時(shí)，不同時(shí)間組之間也存在顯著差異(P<0.05)。在4℃、-12℃時(shí)，4h、168h組高于正常對照組。⑷20℃時(shí)，8h、24h、48h時(shí)間點(diǎn)，Con-A和LPS刺激組低于正常對照組(P<0.05)，1h、12h、168h時(shí)間點(diǎn)，Con-A和LPS刺激組高于正常對照組，并以Con-A刺激組較為顯著。⑸4℃時(shí)，1h、4h、8h、168h時(shí)間點(diǎn)，Con

6、-A和LPS刺激組高于正常對照組，而12h、24h、48h時(shí)間點(diǎn)，Con-A和LPS刺激組低于正常對照組。⑹-12℃時(shí)，除48h時(shí)間點(diǎn)外，Con-A組均低于正常對照組，而4h、24h、168h時(shí)間點(diǎn)，LPS刺激組低于正常對照組。⑺37℃時(shí)，1h、48h時(shí)間點(diǎn)，LPS刺激組低于正常對照組。⑻CD4+CD25+在非刺激條件下不同時(shí)間、不同溫度表達(dá)變化差異很大，其中1h、12h、168h組不同溫度組之間存在顯著差異(P<0.05)，而-12℃

7、、37℃組，不同時(shí)間組之間也存在顯著差異(P<0.05)。4℃時(shí)，1h、12h、24h、48h組低于正常對照組，-12℃時(shí)，12h、168h組低于正常對照組，37℃時(shí)，1h、48h組低于正常對照組，以后者較為顯著。⑼CD4+CD25+在LPS刺激條件下不同時(shí)間、不同溫度表達(dá)變化差異很大，其中1h、4h、8h、168h組不同溫度組之間存在顯著差異(P<0.05)，而-12℃、37℃組，不同時(shí)間組之間也存在顯著差異(P<0.05)。4℃時(shí)，

8、4h、12h、24h、48h組低于正常對照組，-12℃時(shí)，12h、168h低于正常對照組，37℃時(shí)，1h、48h組低于正常對照組，以后者較為顯著。⑽CD4+CD25+在Con-A刺激條件下不同時(shí)間、不同溫度表達(dá)變化差異很大，其中1h、8h、24h、168h不同溫度組之間存在顯著差異(P<0.05)，而37℃、-12℃組，不同時(shí)間組之間也存在顯著差異(P<0.05)。-12℃時(shí)，12h、48h、168h組低于正常對照組，37℃時(shí)，1h、4

9、8h組低于正常對照組。⑾20℃時(shí)，1h、24h時(shí)間點(diǎn)，Con-A刺激組低于正常對照組，1h、12、168h時(shí)間點(diǎn)，LPS刺激組低于正常對照組，并以Con-A刺激組較為顯著。⑿4℃時(shí)，8h、168h時(shí)間點(diǎn)，正常對照組與Con-A和LPS刺激組之間有差異(P<0.05)，但4h、8h、24h時(shí)間點(diǎn)Con-A刺激組低于正常對照組。⒀-12℃時(shí)，4h、12h時(shí)間點(diǎn)，正常對照組與Con-A和LPS刺激組之間有差異(P<0.05)，但12h、24h

10、時(shí)間點(diǎn)Con-A和LPS刺激組均顯著低于正常對照組。⒁37℃時(shí)，LPS刺激組48h、168h高于正常對照組。⒂CD4+CD25+Foxp3+在非刺激條件下不同時(shí)間、不同溫度表達(dá)變化差異很大，其中4h、12h、24h、168h不同溫度組之間存在顯著差異(P<0.05)，而-12℃、37℃，不同時(shí)間組之間也存在顯著差異(P<0.05)。4℃時(shí)，1h、12h組高于正常對照組，4h、8h、24h、48h、168h低于正常對照組；-12℃時(shí)1h、

11、168h低于正常對照組；37℃時(shí)，4h、8h、48h、168h低于正常對照組，1h、12h、24h高于正常對照組；-12℃降低較為顯著。⒃CD4+CD25+Foxp3+在LPS刺激條件下不同時(shí)間、不同溫度表達(dá)變化差異較大，其中168h，不同溫度組之間存在顯著差異(P<0.05)，而20℃、-12℃、37℃，不同時(shí)間組之間也存在顯著差異(P<0.05)。在4℃時(shí)，1h、168h組低于正常對照組；-12℃時(shí)，4h、24h組高于正常對照組，在

12、1h、8h、12h、48h、168h組低于正常對照組；37℃時(shí)，4h、12h、24h組高于正常對照組，1h、8h、48h、168h組低于正常對照組。⒄CD4+CD25+Foxp3+在Con-A刺激條件下不同時(shí)間、不同溫度表達(dá)變化差異較大，其中8h、12h，不同溫度組之間存在顯著差異(P<0.05)，而-12℃、37℃時(shí)，不同時(shí)間組之間也存在顯著差異(P<0.05)。在4℃時(shí)，1h、168h組低于正常對照組；-12℃時(shí)，1h、168h組低

13、于正常對照組；37℃時(shí)，12h組高于正常對照組，1h、4h、8h、48h、168h組低于正常對照組。⒅20℃時(shí)，12h、24h時(shí)間點(diǎn)，正常對照組與Con-A和LPS刺激組之間有差異(P<0.05)，8h、12h、24h、48h時(shí)間點(diǎn)，Con-A刺激組明顯高于正常對照組；⒅4℃時(shí)，4h、8h時(shí)間點(diǎn)正常對照組與Con-A和LPS刺激組之間有差異(P<0.05)，24h、48h時(shí)間點(diǎn)，Con-A刺激組明顯高于正常對照組；而24h、48h、16

14、8h時(shí)間點(diǎn)，LPS刺激組高于正常對照組。⒆-12℃時(shí)，1h、48h時(shí)間點(diǎn)，正常對照組與Con-A和LPS刺激組之間有差異(P<0.05)，但1h、48h時(shí)間點(diǎn)，Con-A刺激組均較正常對照組高，24h、48h時(shí)間點(diǎn)，LPS刺激組均明顯低于正常對照組。⒇37℃時(shí)，4h、12h、168h時(shí)間點(diǎn)，正常對照組與Con-A和LPS刺激組之間有差異(P<0.05)，而4h、48h時(shí)間點(diǎn)，Con-A刺激組在明顯高于正常對照組。
　　 結(jié)論：①

15、非刺激條件下，在168小時(shí)中，極端溫度(-12℃、37℃)均上調(diào)了CD4+輔助性T細(xì)胞，極端溫度(-12℃、37℃)均下調(diào)了CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞。②極端溫度(-12℃、37℃)條件下，Con-A刺激抑制了CD4+輔助性T的表達(dá)。③極端溫度(-12℃、37℃)條件下，LPS刺激抑制了CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的表達(dá)，但是Con-A刺激在極冷溫度組中是加強(qiáng)了CD4+CD25+Foxp3+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的表