不同品系雞akirin2和miR-155的克隆與表達(dá)特性分析.pdf

1、肌肉發(fā)育和抗病性狀相關(guān)基因的篩選和鑒定，對(duì)于雞的品種改良和育種具有重要的理論參考和利用價(jià)值。NF-κB是調(diào)控免疫應(yīng)答和肌肉分化過程的重要轉(zhuǎn)錄因子，AKIRIN2通過間接作用NF-κB復(fù)合物，正向調(diào)控包括IL-6在內(nèi)的多種基因的轉(zhuǎn)錄，并且akirin2基因與牛的肌內(nèi)脂肪含量和禽類肌纖維的發(fā)育存在相關(guān)性；而miR-155是一個(gè)NF-κB下游調(diào)控的非編碼小RNA，不但參與調(diào)控髓系細(xì)胞的增殖、活化和T、B細(xì)胞的分化，而且miR-155可以通過靶

2、向肌肉發(fā)育相關(guān)基因而調(diào)控成肌細(xì)胞的分化。本研究選擇與肌肉發(fā)育和免疫相關(guān)的靶基因akirin2和miR-155，分析其在不同品系雞中的序列信息和表達(dá)分布特性，以期為雞的品系改良和分子育種相關(guān)候選基因的篩選提供理論參考。主要研究方法和實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下：
　　新城疫弱毒苗免疫雛雞的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：免疫后7天時(shí)，akirin2在肝中高表達(dá)，其余組織表達(dá)變化不明顯；免疫后14天時(shí)，akirin2在法氏囊中高表達(dá)，在肝中表達(dá)下調(diào)。研究結(jié)果暗示aki

3、rin2不僅參與了天然免疫反應(yīng)，而且對(duì)雛雞的適應(yīng)性免疫也具有重要作用。
　　不同品系雞akirin2序列比較與表達(dá)特性分析結(jié)果表明：在四個(gè)品系雞akirin2編碼區(qū)的5＇端存在4個(gè)SNP位點(diǎn)，這4個(gè)堿基突變導(dǎo)致相應(yīng)位點(diǎn)三個(gè)氨基酸殘基的改變。結(jié)構(gòu)預(yù)測分析并未發(fā)現(xiàn)AKIRIN2蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)的差異，但有幾處蛋白結(jié)合位點(diǎn)的位置和數(shù)量發(fā)生了細(xì)微的改變，推測對(duì)AKIRIN2蛋白的表達(dá)和活性可能產(chǎn)生一定的影響。同一品系不同日齡雞的表達(dá)分析結(jié)果顯

4、示，akirin2在各組織中廣泛表達(dá)，在法氏囊、脾、血液等免疫組織中表達(dá)均為較高水平，隨著日齡的增長，akirin2在肌肉中的表達(dá)呈現(xiàn)出了降低的趨勢。不同品系同一日齡雞的表達(dá)分析結(jié)果顯示，akirin2在肌肉、心臟、肌胃和胸腺中的表達(dá)均較低，在血液、大腸、腺胃和肝臟中的表達(dá)均較高，但是在兩個(gè)品系雞的脂肪和脾等組織表現(xiàn)出了表達(dá)水平上的差異。
　　miR-155的序列分析以及組織表達(dá)譜結(jié)果表明：三個(gè)品系雞pri-miR-155的序列長