NSCLC的WZB117耐藥株建立及耐藥機制研究.pdf

1、目的:肺癌的主要特征是肺組織中出現(xiàn)不受控制的細胞生長，可以轉(zhuǎn)移到附近的組織或擴散到肺以外的區(qū)域。在肺癌治療中抗腫瘤藥物的廣泛使用，使得癌細胞出現(xiàn)對藥物抵抗的能力。個體在對藥物的敏感程度上不同，具有適應(yīng)性的癌細胞能在藥物治療中存活下來，表現(xiàn)出更強的耐藥性。一些抗腫瘤藥物的原理是通過結(jié)合特殊蛋白或分子來抑制癌癥細胞發(fā)展，最后使其自行衰亡?？鼓[瘤藥物的特定靶點只特異性結(jié)合一種癌細胞的特定蛋白或者分子，所以藥物只能抑制癌細胞的一條通路。在耐藥性

2、沒產(chǎn)生之前，癌細胞的某一通路持續(xù)受到抑制，患者的病情得以控制。這是很多癌癥患者在未出現(xiàn)耐藥性的時候服用單靶點治療藥物，治療效果非常顯著的主要原因。在某一通路受到抑制的同時，癌細胞選擇其他通路促進自身的生長。最終，抗腫瘤藥物將徹底失去治療效果，藥物難以抑制癌細胞的發(fā)展，產(chǎn)生了耐藥性。
　　WZB117是葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白1的抑制劑，一種新型的抗腫瘤藥物。已有研究表明，WZB117對肺癌和乳腺癌有治療效果。WZB117可以減少細胞運輸葡萄

3、糖，從而降低癌細胞中葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白1、細胞內(nèi)ATP以及糖酵解酶水平，導(dǎo)致癌細胞周期阻滯、衰老和壞死。
　　本研究目的明確，在人非小細胞肺癌中成功構(gòu)建WZB117耐藥株，并以此為基礎(chǔ)探究耐藥機制。
　　方法:1.經(jīng)過預(yù)實驗和誘導(dǎo)耐藥成功構(gòu)建人非小細胞肺癌WZB117耐藥株(H1299/WZB117)。2.顯微鏡下觀察H1299和H1299/WZB117的細胞形態(tài)。3.進行平板克隆和CCK8實驗檢測WZB117對H1299和H1

4、299/WZB117增殖和生存能力的影響。4.利用劃痕實驗檢測WZB117對H1299和H1299/WZB117遷移能力的變化。5.通過流式細胞術(shù)細胞凋亡實驗檢測WZB117對H1299和H1299/WZB117凋亡的影響。6.提取H1299和H1299/WZB117的RNA進行RNA-Seq測序，對測序結(jié)果進行GO分析。7.根據(jù)GO分析結(jié)果，提出耐藥機制的假設(shè)，設(shè)計引物通過PCR驗證。
　　結(jié)果:1.成功構(gòu)建H1299/WZB1

5、17。2.顯微鏡下觀察，與H1299相比H1299/WZB117細胞形態(tài)發(fā)生變化，異型性增加，觸角伸出，細胞更加狹長。3.WZB117明顯抑制H1299的克隆形成能力和細胞活力，對H1299/WZB117的抑制作用較小。4.WZB117明顯抑制H1299的遷移，對H1299/WZB117的抑制作用較小。5.WZB117誘導(dǎo)H1299發(fā)生細胞凋亡，對H1299/WZB117的誘導(dǎo)作用較小。6.H1299/WZB117對WZB117抵抗可能

6、基因的剪接、上調(diào)和下降有關(guān)。H1299/WZB117的耐藥發(fā)生可能與NUMA1的長短剪接本含量變化有關(guān)。H1299/WZB117中NUMA1發(fā)生了剪接本含量的變化，SCD和FAM198B含量上升，ID3和ICAM1含量減少。
　　結(jié)論:本研究成功構(gòu)建了H1299/WZB117，細胞表型實驗證明WZB117可以明顯抑制H1299的增殖、遷移和誘導(dǎo)凋亡，并且對H1299/WZB117的效果并不顯著。同時對耐藥機制進行了初步探討，為解決