超聲造影評(píng)價(jià)閉合性肝創(chuàng)傷后組織修復(fù)情況的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:
　　 本文旨在通過研究閉合性肝創(chuàng)傷后不同時(shí)期超聲二維圖像、超聲造影圖像的特征,凝血功能、肝功能、血常規(guī)的動(dòng)態(tài)改變與病理改變之間的相關(guān)關(guān)系,驗(yàn)證超聲造影對(duì)肝創(chuàng)傷的診斷可靠性及肝修復(fù)再生情況評(píng)價(jià)的可行性與準(zhǔn)確性,為超聲造影診斷閉合性肝創(chuàng)傷及對(duì)肝創(chuàng)傷修復(fù)再生情況的評(píng)價(jià)提供可靠依據(jù)。
　　 方法:
　　 第一部分研究常規(guī)灰階超聲與超聲造影在閉合性肝創(chuàng)傷后不同時(shí)期的超聲圖像表現(xiàn)。24只新西蘭大白兔給予氯胺酮0.15

2、ml/kg腹腔注射,速眠新lml/kg肌肉注射麻醉后,取仰臥位固定于手術(shù)臺(tái)上,用8％的NaZS脫毛處理,實(shí)驗(yàn)采用自制的BIM-Ⅳ型生物撞擊機(jī)垂直右胸壁第4、5肋間與腹正中線交界處,撞擊實(shí)驗(yàn)兔肝區(qū),建立閉合性肝創(chuàng)傷模型,撞擊后觀察兔一般狀態(tài)。創(chuàng)傷后平均隨機(jī)分為3組,每組7只,分別為創(chuàng)傷后即刻、3d、7d等不同的觀測(cè)時(shí)間點(diǎn)對(duì)兔肝臟進(jìn)行常規(guī)超聲及超聲造影檢查,觀察肝實(shí)質(zhì)創(chuàng)傷區(qū)部位、范圍、邊界、肝包膜破裂、有無活動(dòng)性出血、有無腹腔積血等數(shù)據(jù),觀

3、察并記錄,應(yīng)用AAST分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)對(duì)損傷程度分級(jí),并與病理檢查結(jié)果對(duì)照。
　　 第二部分本課題研究了閉合性肝創(chuàng)傷后不同時(shí)期血液中凝血功能、肝功能及血常規(guī)的動(dòng)態(tài)變化。在第一部分建立的閉合性肝創(chuàng)傷動(dòng)物模型的基礎(chǔ)上,按照不同時(shí)間點(diǎn)(分別為創(chuàng)傷后6h、12h、24h、48h、3d),在超聲定位下抽取下腔靜脈血,檢測(cè)丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、凝血功能四項(xiàng),包括凝血酶原時(shí)間(PT),活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT

4、),凝血酶時(shí)間(TT)和纖維蛋白原(Fib)以及血常規(guī)包括白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)(RBC)、血小板計(jì)數(shù)(PLT)等指標(biāo),觀察創(chuàng)傷后不同時(shí)期肝功能、凝血功能以及血常規(guī)的變化。
　　 第三部分本課題研究了閉合性肝創(chuàng)傷后不同時(shí)期組織。VEGF、Ki-67的表達(dá)水平。在第一部分建立的閉合性肝創(chuàng)傷模型的基礎(chǔ)上,于創(chuàng)傷后不同時(shí)間(分別為創(chuàng)傷后即刻、3d、7d)分別進(jìn)行常規(guī)超聲及超聲造影檢查,在每次觀察后經(jīng)心臟注入10ml空氣處死兔

5、子,進(jìn)行解剖,大體觀察肝臟創(chuàng)傷區(qū)外觀,凡是具有肉眼病理特征受損的部位及正常肝組織均取材,用體積分?jǐn)?shù)為4％的甲醛溶液固定,石蠟包埋,5um切片,HE染色,光鏡下觀察其組織形態(tài)學(xué)變化,并通過免疫組化法檢測(cè)正常肝組織及創(chuàng)傷區(qū)肝組織中VEGF、Ki-67的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 24只新西蘭大白兔成功建立閉合性肝損傷模型,根據(jù)美國(guó)創(chuàng)傷外科協(xié)會(huì)(AAST)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行分級(jí),本模型為Ⅱ級(jí)創(chuàng)傷。常規(guī)超聲表現(xiàn):創(chuàng)傷即刻組,相對(duì)輕度的

6、肝創(chuàng)傷聲像圖無明顯變化,被膜下小裂口難以顯示,較重的創(chuàng)傷區(qū)表現(xiàn)為局部回聲略增強(qiáng),欠均勻,邊界不清,肝周及腹腔積液顯示清晰,創(chuàng)傷后3d組,肝包膜下及實(shí)質(zhì)內(nèi)血腫顯示為肝內(nèi)不規(guī)則的強(qiáng)弱不等回聲,部分呈等回聲或近似等回聲,損傷區(qū)邊界不清晰,不易辨認(rèn),彩色及能量多普勒顯示損傷區(qū)內(nèi)血流信號(hào)不明顯,創(chuàng)傷后7d組,創(chuàng)傷區(qū)可見回聲明顯增強(qiáng),邊界尚清,形態(tài)欠規(guī)則,彩色及能量多普勒顯示創(chuàng)傷區(qū)周邊可見點(diǎn)棒狀血流信號(hào)。超聲造影表現(xiàn):創(chuàng)傷后即刻組,創(chuàng)傷區(qū)在動(dòng)脈期、

7、門脈期、實(shí)質(zhì)期始終無增強(qiáng),邊界清晰,與周圍正常組織的造影劑灌注一持續(xù)一消退的動(dòng)態(tài)顯像形成鮮明對(duì)比,被膜破裂處可見臟器表面增強(qiáng)圖像不連續(xù),局部呈低增強(qiáng)或無增強(qiáng);創(chuàng)傷后3天組,創(chuàng)傷區(qū)在動(dòng)脈期、門脈期、始終無增強(qiáng),與周圍正常肝組織分界清晰,可見創(chuàng)傷區(qū)周邊向內(nèi)部增強(qiáng);創(chuàng)傷后7天組,可見創(chuàng)傷區(qū)在動(dòng)脈相自周邊組織向內(nèi)部開始增強(qiáng),創(chuàng)傷中心尚呈無增強(qiáng),門脈相呈低增強(qiáng)。病理學(xué)變化:光鏡下創(chuàng)傷后即刻組,創(chuàng)傷灶與正常肝組織染色不同,創(chuàng)傷灶處細(xì)胞變性(水腫為主

8、),間質(zhì)區(qū)可見充血,出血;創(chuàng)傷后3天組,肝內(nèi)血管結(jié)構(gòu)形態(tài)未見異常,肝竇無充血、擴(kuò)張,肝細(xì)胞未見變性、壞死,肝臟未見水腫和炎性細(xì)胞浸潤(rùn)改變創(chuàng)傷灶處肝細(xì)胞凝固性壞死,壞死灶與正常肝組織交界處可見炎細(xì)胞浸潤(rùn),以淋巴細(xì)胞,中性粒細(xì)胞為主;創(chuàng)傷后7天組,壞死灶形態(tài)無明顯改變,壞死灶與正常肝組織交界處可見小血管,有少量成纖維細(xì)胞增生,同時(shí)伴有少量炎細(xì)胞浸潤(rùn);免疫組化檢測(cè):VEGF的表達(dá)VEGF陽性細(xì)胞為胞漿或胞膜均勻的棕黃染色。創(chuàng)傷后即刻組,未見v

9、EGF陽性細(xì)胞表達(dá);創(chuàng)傷后3d組,VEGF陽性細(xì)胞(+),染色強(qiáng)度弱,創(chuàng)傷后7d組,VEGF陽性細(xì)胞(++),染色強(qiáng)度強(qiáng)。
　　 肝功能改變:創(chuàng)傷后ALT、AST、白細(xì)胞數(shù)水平增高,與正常對(duì)照組比較,有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異(P＜0.05),ALT在傷后6h開始升高,12h達(dá)到峰值,之后緩慢下降,在傷后3d基本恢復(fù)到創(chuàng)傷前水平,AST在創(chuàng)傷后6h達(dá)峰值,之后緩慢下降,于創(chuàng)傷后3d基本恢復(fù)到創(chuàng)傷前水平;血常規(guī)改變:白細(xì)胞計(jì)數(shù)在創(chuàng)傷后6h

10、升高非常明顯,12h達(dá)到峰值,之后緩慢下降,紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血小板計(jì)數(shù)在創(chuàng)傷后降低,有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異(P＜0.05),紅細(xì)胞計(jì)數(shù)在創(chuàng)傷后6h明顯下降,24h達(dá)最低值,48h開始升高,3d可達(dá)創(chuàng)傷前水平;血小板計(jì)數(shù)創(chuàng)傷后即刻就出現(xiàn)降低,創(chuàng)傷后6h明顯減低,到創(chuàng)傷后3d達(dá)最低值;凝血功能改變:APTT創(chuàng)傷后6h明顯升高,12h達(dá)到峰值,之后迅速回落;PT創(chuàng)傷后6h迅速升高,12h迅速回落,24h達(dá)谷底,之后又迅速增高,48h達(dá)峰值水平,之后緩慢

11、下降;TT創(chuàng)傷后6h降低,于24h降到谷底,48h升高,至3d升高到接近創(chuàng)傷前水平。Fib創(chuàng)傷后6h降低明顯,12h、24h無明顯變化,48h迅速升高,達(dá)峰值水平,之后緩慢下降,與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論:
　　 超聲造影診斷肝臟閉合性損傷時(shí)敏感性較高,明顯高于常規(guī)超聲,對(duì)創(chuàng)傷范圍、程度能夠準(zhǔn)確進(jìn)行分級(jí),與病理結(jié)果呈中等一致性,并且隨著創(chuàng)傷時(shí)間的延長(zhǎng),超聲造影圖像表現(xiàn)在不同時(shí)期均有其各自的特點(diǎn),可以準(zhǔn)確的