人真皮干細胞標記示蹤方法的比較研究.pdf

1、研究背景：
　　 干細胞具有自我更新和多向分化潛能的特性。利用干細胞移植進行疾病治療已成為干細胞研究的熱點。干細胞的標記和示蹤能夠為闡明干細胞在移植受體內的定植、分布、遷移和分化等生物學行為提供重要依據(jù)，對干細胞移植研究具有重要意義。本課題擬探討利用熒光染料PKH26、核酸標記物BrdU以及人源性細胞特異性識別抗體等三種方法用于干細胞體內示蹤，分析三種方法的優(yōu)缺點，為研究干細胞在體移植后的生物學評價提供依據(jù)。
　　 研究

2、方法：
　　 第一部分，以人真皮干細胞為研究對象，觀察熒光染料PKH26、核酸標記物BrdU以及三種人源性細胞特異性識別抗體來體外標記和檢測干細胞的效果。
　　 第二部分，以不同劑量全身輻射C57BL/6J小鼠動物損傷模型作為受試體，以2×106個細胞/只尾靜脈移植經不同方法標記的人真皮干細胞，于不同時間點取材，應用普通光學顯微鏡或熒光顯微鏡觀察各種方法檢測細胞在組織器官中的分布情況。
　　 研究結果：
　

3、　 本研究主要結果如下：
　　 1.經BrdU體外標記的人真皮干細胞經靜脈移植受試小鼠后，可通過抗BrdU抗體檢測到人真皮干細胞在受試小鼠肺內的定植；
　　 2.經PKH26體外標記的人真皮干細胞經靜脈移植受試小鼠后，未能檢測到人真皮干細胞在受試小鼠各個臟器的定植情況；
　　 3.本研究中所嘗試的三種商品化的人源性細胞特異性識別抗體，其中小鼠抗人β-2-Microglobulin抗體(Santa Cruz，sc

4、-80668)和小鼠抗人endoglin抗體(Dako，M3527)在體外均不能特異性識別人源性細胞。小鼠抗人nuclei抗體(Millipore，MAB1281)能夠在體外特異性識別人源性細胞，但人真皮干細胞經靜脈移植受試小鼠后，通過小鼠抗人nuclei抗體未能檢測到人真皮干細胞在受試小鼠各個臟器的定植情況。
　　 結論：
　　 本課題研究中，我們通過利用熒光染料PKH26、核酸標記物BrdU以及三種人源性細胞特異性識

5、別抗體來體外標記干細胞并進行體內示蹤，比較了三種標記方法的優(yōu)缺點。本課題取得的主要研究結論包括：
　　 1.核酸標記物BrdU具有較高的體外標記效率和較為穩(wěn)定的體內示蹤特性，可作為干細胞體外標記及體內示蹤方法應用于干細胞移植研究；
　　 2.熒光染料PKH26具有較高的體外標記效率，但用于干細胞體內示蹤時，其分辨率和信號強度等問題不夠理想；
　　 3.基于人源性細胞特異性識別抗體的檢測方法在研究干細胞體內示蹤的過