電磁場(chǎng)刺激自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)皮注射治療大鼠脛腓骨骨折的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　 1.研究強(qiáng)度為1.0mT電磁場(chǎng)對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外凋亡，增殖以及FGF-2和FGFR-2 mRNA表達(dá)的影響。
　　 2.研究經(jīng)皮注射接受頻率為15Hz、強(qiáng)度為1.0mT電磁場(chǎng)曝磁處理的自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)大鼠脛腓骨骨折愈合的影響。
　　 方法：
　　 1.體外分離培養(yǎng)SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs），倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)及生長(zhǎng)特征。取第3代細(xì)胞，按電磁場(chǎng)頻率及作用時(shí)間的

2、不同分組，接受強(qiáng)度為1.0mT的電磁場(chǎng)曝磁處理。研究電磁場(chǎng)對(duì)細(xì)胞凋亡和增殖的影響，繪制出生長(zhǎng)曲線，采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）技術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞的FGF-2和FGFR-2 mRNA表達(dá)，并進(jìn)行定量分析。
　　 2．將30只SD大鼠，隨機(jī)分為BMSCs+EMF組，BMSCs組和對(duì)照組。麻醉下抽取股骨骨髓，貼壁法分離純化獲取骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，體外培養(yǎng)至第三代。BMSCs+EMF組大鼠的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞接受頻率為15Hz、強(qiáng)

3、度為1.0mT的電磁場(chǎng)刺激，BMSCs組大鼠的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行假刺激。建立大鼠右側(cè)脛腓骨中段骨折模型。將BMSCs+EMF組和BMSCs組的自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)皮注入骨折部位，對(duì)照組注入等體積生理鹽水。分別于術(shù)后當(dāng)日及第1,2,3,4周末，拍攝Ｘ線片評(píng)價(jià)骨折愈合情況；相同時(shí)間點(diǎn)鼠尾靜脈取血，采用對(duì)硝基苯磷酸鹽法檢測(cè)血清堿性磷酸酶（ALP）活性，酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)大鼠血清骨鈣素（BGP）含量，于術(shù)后第2,4周末行病理學(xué)切片檢查，觀察

4、骨痂組織學(xué)變化。
　　 結(jié)果：
　　 1.經(jīng)電磁場(chǎng)刺激的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞仍呈長(zhǎng)梭形或多邊形，細(xì)胞生長(zhǎng)曲線呈S形。與非刺激組相比，刺激組細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛，其中頻率為15Hz，強(qiáng)度為1mT的電磁場(chǎng)每天刺激2小時(shí)促進(jìn)細(xì)胞增殖效果最明顯，該組細(xì)胞FGF-2和FGFR-2 mRNA的表達(dá)量較非刺激組也顯著增高。
　　 2.與對(duì)照組相比，BMSCs+EMF組大鼠血清中ALP活性提高（P<0.05），血清中BGP的含量增加（P<0

5、.05），在4周內(nèi)骨折區(qū)域新生骨的數(shù)量和質(zhì)量明顯優(yōu)于BMSCs組，骨折線消失所用時(shí)間更短，而對(duì)照組骨折區(qū)域以纖維組織為主，直到第4周末也未達(dá)到完全愈合。
　　 結(jié)論：
　　 通過(guò)以上研究，我們認(rèn)為頻率為15Hz、強(qiáng)度為1.0mT的電磁場(chǎng)可以促進(jìn)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增值，增高FGF-2和FGFR-2 mRNA的表達(dá)；骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)皮移植可以加快骨折部位骨痂的形成，聯(lián)合應(yīng)用電磁場(chǎng)刺激進(jìn)一步增強(qiáng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞促進(jìn)骨折愈合