人E-鈣粘素融合蛋白基質化促進臍帶間充質干細胞增殖的研究.pdf

1、細胞生長受諸多因素的影響，其中，可溶性生物信號分子、不溶性細胞外基質和細胞表面粘附分子共同構成的細胞外微環(huán)境，對細胞的增殖、遷移及其功能表達起調節(jié)控制作用。近年來，利用組織工程學原理仿生構建細胞外微環(huán)境已經(jīng)成為再生醫(yī)學和生物材料學領域研究的熱點。其中，基于基因重組生物工程技術的多功能融合蛋白的成功研制為仿生構建人工細胞外基質提供了新的方向。本論文工作旨在設計、制備仿生細胞間相互作用的細胞外基質材料，并用于臍帶間充質干細胞(hUC-MSC

2、s)體外培養(yǎng)，考察并揭示其對hUC-MSCs生物學行為的影響及其調控規(guī)律，為間充質干細胞的體外大量擴增及分化應用提供了理論和實踐基礎。
　　本論文工作中，我們首先將本實驗室開發(fā)的人E-鈣粘素與IgG Fc的融合蛋白(hE-cad-Fc)吸附固定于聚苯乙烯培養(yǎng)板表面，并考察了其作為二維細胞培養(yǎng)基質對hUC-MSCs增殖活性的影響。Elisa檢測結果表明hE-cad-Fc能夠穩(wěn)定吸附在疏水材料表面;細胞黏附實驗表明hE-cad-Fc基

3、質化顯著改善材料表面的hUC-MSCs細胞黏附，且其黏附具有鈣離子依賴性;EdU和細胞骨架染色結果顯示，hE-cad-Fc基質在促進hUC-MSCs增殖的同時，能更好的保持細胞長梭型的細胞形態(tài);免疫熒光染色顯示hE-cad-Fc基質表面hUC-MSCs的E-cadherin和β-catenin蛋白表達上調。
　　我們進一步將hE-cad-Fc用于PLGA微球表面改性，并用于hUC-MSCs的三維培養(yǎng)，考察了其對細胞黏附、形態(tài)及增殖

4、的影響。掃描電子顯微鏡(SEM)觀察顯示PLGA微球表面光滑，呈獨立分散的規(guī)整的圓球形，粒徑約10-30μm。Elisa及免疫熒光染色實驗表明hE-cad-Fc可以均勻、穩(wěn)定吸附在PLGA微球表面，最大吸附量為1.95μg/cm2，且其飽和吸附量及吸附效率均高于二維平板。CCK-8細胞活性檢測結果表明hE-cad-Fc表面改性PLGA微球對hUC-MSCs具有良好的細胞生物相容性。最后，EdU染色和中、高密度細胞培養(yǎng)條件下細胞骨架染色進