ACEI在糖尿病大鼠缺血性血管再生中的作用及相關機制研究.pdf

1、目的：目前關于糖尿病(DM)患者新生血管形成缺陷是否與血管生長因子的表達下調有關尚存在爭議。血管緊張素轉換酶抑制劑(ACEI)由于其確切的降壓療效和靶器官保護作用在臨床中應用廣泛。但關于該類藥物在肢體缺血性血管再生中究竟發(fā)揮促進還是抑制作用及其下游信號通路目前尚無定論。本課題的目的在于探討DM大鼠肢體缺血性血管再生受損的原因以及ACEI-培哚普利在缺血后血管再生中的作用及相關分子通路。為盡快闡明ACEI在血管性疾病中的作用機制提供實驗基

2、礎和理論依據(jù)。 方法：以雄性Wistar大鼠為研究對象，STZ誘導1型糖尿病(T1DM)模型。單側股動脈結扎誘導后肢缺血。將DM大鼠分為非處理組、培哚普利治療組、培哚普利+NOS阻斷劑治療組：ACEI+BK-B1R拮抗劑治療組。將正常大鼠分為非處理組和培哚普利治療組。術后第2天分別給予上述治療。在治療1周和4周時分批處死動物。通過HE染色和免疫組化染色法定量測定后肢肌肉的MVD。RT-PCR和Western免疫印跡法分析后肢肌肉

3、中eNOS、VEGF、bFGF的mRNA和蛋白表達水平。分別用NO和NOS測試盒測定肌肉中NO含量和eNOS活性。所有數(shù)據(jù)均以x±s表示。采用t檢驗和單因素方差分析進行相應統(tǒng)計學分析。以P<0.05為有統(tǒng)計學差異。 結果： 1.一般情況比較：與正常對照(Con)組大鼠相比，DM大鼠的體重低于對照組，而血糖高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)。各個治療組間血壓差別無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 2.血管再生

4、分析：治療1周和4周時，Con組和DM組非缺血側肌肉MVD均相似。在缺血側，DM組比Con組的MVD分別降低23％和27％。培哚普利對正常和DM大鼠非缺血側肌肉MVD均無影響；但使缺血側肌肉MVD明顯增加，這種促血管再生作用在DM組的表現(xiàn)更為顯著。聯(lián)合NOS阻斷劑和BK-B1R拮抗劑治療使缺血側MVD較單藥治療組明顯下降。在一周時分別下降47％和49％；4周時分別下降45％和45％。 3.分子機制：與Con組相比，DM大鼠缺血肢

5、體的eNOS、VEGF和bFGF的mRNA和蛋白表達、NO含量及cNOS活性均明顯下降。培哚普利治療1周和4周后正常和DM大鼠上述指標均有不同程度提高，并在DM組的表現(xiàn)更為明顯。聯(lián)合BK-B1R拮抗劑使缺血側eNOS、VEGF和bFGF的表達、NO含量及cNOS活性下降；聯(lián)合NOS阻斷劑使缺血側eNOS和bFGF的表達、NO含量及cNOS活性下調，但不影響VEGF的表達。提示培哚普利的促血管新生作用部分由BK-B1R介導，其下游信號分子

6、包括eNOS、VEGF和bFGF。其中VEGF位于eNOS的上游，而bFGF位于eNOS的下游。 4.相關分析：缺血組織的MVD與eNOS、VEGF和bFGF的mRNA和蛋白表達、NO含量及cNOS活性均呈正相關。 結論：DM狀態(tài)下大鼠缺血肢體的血管再生和相關生長因子的表達及活性受損。培哚普利對正常和DM大鼠肢體缺血性血管再生均具有促進作用，這種影響在DM組的表現(xiàn)更為顯著。并與eNOS、VEGF、bFGF的表達上調、NO