基于乙肝核心抗原的治療性疫苗研究.pdf

1、乙型肝炎感染是世界特別是我國(guó)最重要的公國(guó)衛(wèi)生問(wèn)題之一，嚴(yán)重的威脅著人們的健康。對(duì)于乙型肝炎的慢性感染尚無(wú)令人滿意的治療措施。大量證據(jù)證明，HBV特異性的細(xì)胞免疫反應(yīng)在HBV清除過(guò)程中起了關(guān)鍵性的作用。因此我們假設(shè)，如果我們可以激起機(jī)體的HBV特異性免疫反應(yīng)，就可以有助于病毒的清除以及病人的康復(fù)。炭疽毒素致死因子N末端(LFn)具有將與其融合的抗原投遞之MHC Ⅰ類和MHC Ⅱ類途徑中的功能，并繼而激發(fā)起特異性免疫反應(yīng)的功能。我們利用這一

2、特性，將HBcAg與LFn融合，研究該融合蛋白是否能激起針對(duì)HBcAg特異性免疫反應(yīng)。 本論文構(gòu)建表達(dá)并純了LFn與HBcAg的融合蛋白，并在尾部加入一個(gè)本實(shí)驗(yàn)室前期發(fā)現(xiàn)的一個(gè)可以被中國(guó)恒河猴限制的表位GDLEITTHSF。 使用LFcE蛋白并配合不同佐劑免疫Balb/c小鼠，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明LFcE與PCPP佐劑相互配合可以激發(fā)HBcAg特異性的細(xì)胞免疫反應(yīng)。 認(rèn)為曾所加表位可能被MamuB*40或者M(jìn)amuB*6

3、7基因型的MHC分子所限制，因此使用PCR-SSP方法對(duì)200余只中國(guó)恒河猴進(jìn)行了Mamu基因分型。得到6只具有MamuB*40基因型的中國(guó)恒河猴、15只具有MamuB*67基因型的中國(guó)恒河猴，其中3只同時(shí)具有上述兩種基因型。 使用PCPP佐劑配合LFcE免疫選定的恒河猴。發(fā)現(xiàn)所有結(jié)果有效的實(shí)驗(yàn)組恒河猴均對(duì)LFcE蛋白產(chǎn)生應(yīng)答。而所有恒河猴都不能對(duì)新加入的表位GDLEITTHSF產(chǎn)生應(yīng)答。另外，發(fā)現(xiàn)了兩個(gè)表位。其中，GELMTL

4、ATW曾經(jīng)被報(bào)道可以被印度恒河猴所限制，而SFLPSDFFPSI是新發(fā)現(xiàn)的表位。我們也發(fā)現(xiàn)這對(duì)于兩個(gè)表位的免疫應(yīng)答具有完全不同的動(dòng)力學(xué)曲線。 使用測(cè)序的方法對(duì)3只恒河猴進(jìn)行了Mamu基因分型，發(fā)現(xiàn)這三只中國(guó)恒河猴的Mamu基因與印度恒河猴Mamu基因差別較大。在分到20個(gè)型中，發(fā)現(xiàn)了4個(gè)新的基因型，以及12個(gè)新基因亞型。分析后我們認(rèn)為SFLPSDFFPSI極有可能被MamuA1*2803所限制，但也不排除被MamuB*68的兩個(gè)